骨桥蛋白与vegf在增生性糖尿病视网膜病变玻璃体

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1、骨桥蛋白与VEGF在增生性糖尿病视网膜病变玻璃体【摘要】　　目的：探讨骨桥蛋白(osteopontin,OPN)与血管内皮生长因子(vascularendothelialgrol-1,VEGF浓度为(1158.68±140.98)pg·ml-1；IMH组OPN浓度为(537.88±166.37)ng·ml-1,VEGF浓度为(295.91±109.62)pg·ml-1。PDR组较IMH组不仅OPN表达增高(P<0.01),VEGF也表达增高(P<0.01)；PDR组玻璃体液中OPN浓度与VEGF浓度呈正相关(r=0.69,P<0.0

2、1)。结论：PDR患者玻璃体液中OPN与VEGF含量高于非糖尿病患者,OPN与VEGF在PDR病理性新生血管的发生、发展中可能起到促增生作用。【关键词】骨桥蛋白；血管内皮生长因子；增生性糖尿病视网膜病变；玻璃体液　　［Abstract］Objective:Toinvestigatethelevelsofosteopontin(OPN)andvascularendothelialgroentofPDR.Methods:ThelevelsofOPNandVEGFinthevitreousof28eyesof28patientsacularhole(IMH

3、group)easuredbyenzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA).Vitreousfluidsamplesy.Results:ThevitreouslevelofOPNl-1］thaninIMHgroup［(537.88±166.37)ng·ml-1,P<0.01］.ThevitreousconcentrationofVEGFl-1］thaninIMHgroup［(295.91±109.62pg·ml-1),P<0.01］.ThevitreousconcentrationofOPNcorrelat

4、edsignificantlyl,标本移至已消毒并硅化的0.5mlEppendorf管,存放于-70℃冰箱备用。　　1.3实验材料　　人OPN试剂盒(humanosteopontinimmunoassay,catalognumberDOST00，美国RD公司产品）,550型酶标仪（美国）,Taq酶(5U·μl-1，美国Invitrogen公司),IQ5荧光定量仪（BIOrad公司）。　　1.3.1玻璃体液OPN与VEGF浓度测定　　从冰箱中取出标本,置于室温下10min待测。根据ELISA试剂盒的说明,将标准品用稀释液定比稀释,充分混匀。将酶标板

5、各孔依次编号,每孔加RD16100μl,并加入50μl标准液或样品,混匀封口。室温下孵化2h,弃液,冲洗液清洗4次。每孔加入200μlOPNConjugate,封口室温下孵化2h。弃液,冲洗液清洗4次。避光情况下每孔加入200μl底物显色溶液,混匀,孵化30min。再每孔加50μl反应终止液,混匀。酶标仪550nm处读数,30min内测定各孔吸光度值(A值)。VEGF测定方法类似。根据定比稀释标准品的A值绘制标准曲线,以样品的A值和标准曲线算出样品中OPN与VEGF的含量。　　1.4统计学处理　　实验数据均以x-±s表示,使用SPSS11.5软件包

6、进行两样本均数的t检验,P<0.05表示差异有统计学意义。　　2结果　　见表1。表1PDR与IMH组玻璃体液中OPN与VEGF水平(略)　　由表1可见PDR组OPN及VEGF表达均较IMH组增高(P<0.01)。经分析PDR组OPN与VEGF相关性回归方程为Y=549+0.690X,见图1。　　3讨论　　PDR的病理机制是血—视网膜屏障的破坏及视网膜新生血管形成造成的玻璃体视网膜增生性改变。OPN是一种带负电荷的分泌性磷酸化糖蛋白,它具有钙结合域、凝血酶裂解位点、整合素以及RGD结合序列等多个功能结合区,可由多种组织细胞合成与分泌,其在许

7、多系统疾病中被发现。OPN参与多种组织细胞损伤的修复过程,有促细胞移动、黏附和增生分化等功能,是一种增生相关蛋白［2］。在基因水平的研究［3］已经证实,OPN在增生相关性疾病中显著高表达,但在PDR中对OPN的临床研究目前还较少。动物研究［4］证实：OPN多存在于视网膜神经节细胞层,在其他视网膜层分布较弱。本研究测得PDR病例玻璃体液中OPN浓度为(883.39±151.12)ng·ml-1,较IMH组(非糖尿病)［(537.88±166.37)ng·ml-1］明显升高。另有研究［5］对PDR病例玻璃体液中OPN与血浆中OPN水平进行了比较,发现其浓

8、度明显高于血浆,故非血眼屏障破坏等因素可以解释玻璃体液中OPN浓度高于血浆中OPN浓度,说明PDR病例玻璃体