mg2+对胎鼠皮层神经元nmda兴奋毒性损伤模型

《mg2+对胎鼠皮层神经元nmda兴奋毒性损伤模型》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、Mg2+对胎鼠皮层神经元NMDA兴奋毒性损伤模型【摘要】目的研究Mg2+对神经细胞兴奋性氨基酸NMDA损伤的保护作用。方法采用原代培养的大鼠皮层神经细胞模型，给予NMDA直接损伤，加入不同浓度的Mg2+，测定神经细胞损伤MTT变化。结果Mg2+对兴奋性氨基酸损伤保护作用在1.0~3.0mmol/L范围内存在，2.0mmol/L效果最好。结论在临床治疗中尽早使用镁剂，剂量根据脑脊液浓度尽快调整到2.0mmol/L保护作用最好。【关键词】NMDA受体；镁离子；脑损伤　　ProtectiveEffectsofMg2+onPrimaryCortical

2、ofRatDamagedModelbyNMDA　　LinYerong,YuYigang　　(1.DepartmentofObstetricsandGynecology,PLA175thHospital,Zhangzhou363000,China;2.DepartmentofNeurosurgery,ZhujiangHospital,Guangzhou510282,China)　　Abstract：ObjectiveToinvestigatetheneuroprotectiveeffectsofMg2+onthedamagebyNMDA.Me

3、thodsUsingprimaryculturedratcorticalneurons,agedbyNMDAandprotectiveeffectsofMg2+.ResultsTheneuroprotectiveeffectofMg2+appearedmol/Landtheeffectosteffectivemol/L.Conclusiong2+earlyinclinic,andadjustitsstrengthto2.0mmol/Linbraincerebralfluid.　KeyaciaBio公司，胰蛋白酶，多聚赖氨酸，谷氨酰胺，N3，NM

4、DA，MK801购自sigma公司。其他试剂均为国产分析纯。（3）设备：二氧化碳细胞培养箱（日本三洋公司），荧光相差显微镜（日本Olympus），DG3022Ａ酶联免疫检测仪(国营华东电子管厂)　　12方法　　121皮层神经细胞培养[1]　　10%水合氯醛2ml麻醉大鼠，无菌操作取胚胎，切取浸泡75%乙醇1min胎鼠头，解剖出完整鼠脑，预冷解剖液中分离去除软膜、血管，取大脑皮质，漂洗，用眼科剪将其碎成块，0.25%胰蛋白酶37℃培养箱中消化30min。接种液洗3次，最后再用接种液1ml混悬。将上述混悬液中组织块反复吹打，见浑浊后将上清液

5、移入培养瓶待用。收集含单细胞悬液的上清液4~5ml于培养瓶中。细胞记数，接种密度1×106个细胞于96孔培养板中。培养24h到细胞贴壁后，换全液用培养液培养4~5d，观察神经元生长良好，换用阿糖胞苷培养液（4mg/L）半液培养48~72h抑制神经胶质细胞及杂细胞生长，得到单纯培养的原代神经细胞。隔3~4d换全液1次。至8~10d后行NMDA损伤保护测定。　　122NMDA毒性损伤和MgSO4保护作用模型[2]分组　　神经细胞培养10d后进行实验，分组如下：1组为空白对照组；2组为NMDA损伤+MK-801（250μmol/L）保护对照组；3

6、组为NMDA（250μmol/L）损伤组；4组为NMDA损伤+Mg0.5mmol/L保护组；5组为NMDA损伤+Mg1.0mmol/L保护组；6组为NMDA损伤+Mg1.5mmol/L保护组；7组为NMDA损伤+Mg2.0mmol/L保护组；8组为NMDA损伤+Mg3.0mmol/L保护组。每组n=16。　　123NMDA损伤MTT测定　　对照组和初始值组:加入10μl的10%的DMSO(用DMEM配制)；实验组：加入倍比稀释的MgSO4各10μl，终浓度分别为500mg/L，165mg/L，55mg/L，18mg/L，6mg/L；孵育1h

7、；去除实验组和对照组的细胞培养液，加入NMDA(250mmol/L)200μl；同时初始值组中加入MTT储存液20μl，作用4h；实验组和对照组各孔中加入MTT储存液20μl，作用4h，存活的细胞中形成紫蓝色结晶：去除各孔中的液体，加入DMSO150μl，溶解紫蓝色结晶；半小时后，待结晶完全溶解，用酶联仪490nm波长测定OD值。　　13统计学处理　　实验设有正常培养神经元组（空白对照），NMDA损伤组（阴性对照），NMDA损伤MK801保护组（阳性对照），每种保护因素分别与之进行比较并相互比较。应用独立完全随机分组设计，首先进行方差齐性检

8、验(Bartlettstest)及正态分布估计。如符合则采用单因素方差分析，OneWayANOVA（F检验）进行分析，如P<0.01，则进一步行