哌嗪雌酚酮对生长期去卵巢小鼠胫骨骨形态计量学的影

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1、哌嗪雌酚酮对生长期去卵巢小鼠胫骨骨形态计量学的影【摘要】目的研究哌嗪雌酚酮(piperazinylestrone，PE)对去卵巢小鼠胫骨松质骨和皮质骨骨量的影响，并探讨其作用机制。方法70只昆明种6周龄雌性小鼠，随机分为7组:⑴基础对照组(Base组)，⑵假手术组(Sham组)，⑶去卵巢模型组(Ovx组)，⑷去卵巢+哌嗪雌酚酮低剂量组(PE1组)，⑸去卵巢+哌嗪雌酚酮中剂量组(PE2组)，⑹去卵巢+哌嗪雌酚酮高剂量组(PE3组)，⑺去卵巢+雌酚酮组(E组)，连续灌胃给药42d。实验后处死小鼠取左胫骨上、中段不脱钙骨制片，进行骨形态

2、计量学参数测定。结果哌嗪雌酚酮可使去卵巢小鼠胫骨上段松质骨骨量增加、骨小梁分离度减少，骨形成和骨吸收降低。与Ovx组比较，PE2组效果最佳，其松质骨骨量增加，骨小梁分离度减少，轻度抑制骨转换;哌嗪雌酚酮对胫骨中段皮质骨影响是促进内膜面骨形成，抑制内膜面骨吸收，但作用不显著。结论哌嗪雌酚酮中剂量组(1.0mg·kg-1·d-1)通过轻度降低骨转换，能有效防止去卵巢小鼠松质骨的骨丢失，对皮质骨作用不明显。【关键词】哌嗪雌酚酮;骨质疏松;去卵巢;骨形态计量学;小鼠骨质疏松己成为严重威胁老年人健康的重大问题，绝经后妇女骨质疏松的发病率为50%

3、，其病因主要是绝经后卵巢功能减退、雌激素水平降低引起骨质丢失。雌激素替代疗法(EstrogenReplacementTherapy，ERT)为防治绝经后骨质疏松的有效方法之一[1]，但长期应用雌激素可能会增加患乳腺癌和子宫内膜癌的危险性[2]。哌嗪雌酚酮是四川大学华西药学院郑虎、翁玲玲两位教授合成的一种新型雌激素衍生物[3]，既往以去势大鼠和老年大鼠为研究对象观察该化合物对骨丢失的防治[45]，本实验以骨代谢快、成骨活性强、药物敏感性高的生长期去卵巢小鼠为动物模型，旨在探讨哌嗪雌酚酮在骨生长状态下对松质骨及皮质骨骨丢失的预防和作用机制

4、，现将结果报道如下。　　1资料和方法　　1.1一般资料　　6周龄雌性昆明种小鼠70只(广东医学院动物中心提供)，体质量为(33.7±1.7)g，随机分成7组，每组10只：⑴基础对照组(Base组)，直接将其处死取材;⑵假手术组(Sham组，注射质量浓度为5g·L-1羧甲基纤维素钠);⑶去卵巢模型组(Ovx组，给予质量浓度为5g·L-1羧甲基纤维素钠);⑷去卵巢+哌嗪雌酚酮低剂量组(PE1组，给予派嗪雌酚酮和羧甲基纤维素钠混合液0.5mg·kg-1·d-1);⑸去卵巢+哌嗪雌酚酮中剂量组(PE2组，给予派嗪雌酚酮和羧甲基纤维素钠混合液

5、1.0mg·kg-1·d-1);⑹去卵巢+哌嗪雌酚酮高剂量组(PE3组，给予派嗪雌酚酮和羧甲基纤维素钠混合液2.0mg·kg-1·d-1);⑺去卵巢+雌酚酮组(E组，给予雌酚酮和羧甲基纤维素钠混合液0.71mg·kg-1·d-1，其中雌酚酮的浓度与PE2组中哌嗪雌酚酮的浓度相同)。除Base组外，其他各组小鼠每周称重1次，连续灌胃给药6周。　　1.2试剂　　哌嗪雌酚酮(纯品，由四川大学华西药学院骨质疏松课题组提供)，混悬于5‰的羧甲基纤维素钠(上海化学试剂厂)。　　1.3方法　　1.3.1骨形态计量学检测[6]所有小鼠于处死前第2、

6、3天和第11、12天分别皮下注射7mg·kg-1钙黄绿素(Calcein)和35mg·kg-1盐酸四环素，42d后，用质量浓度为10g·L-1的戊巴比妥钠麻醉并用注射器穿其右心室抽血处死，取左侧胫骨，并用低速锯(Buehler,LTD.USA)沿额状面锯开干骺端，以暴露骨髓腔，再于胫骨上端1/3处横行锯断胫骨，取近心端骨做不脱钙骨包埋后，用硬组织切片机(Leica2155,German)切成8μm的厚骨片(用于测量松质骨动态参数)和5　μm的薄骨片(采用MassonGoldnerTrichrome染色后，进行酒精梯度脱水，过二甲苯，透

7、明后树脂封片，用于测量松质骨的静态参数)。　　1.3.2胫骨中段皮质骨骨片的制备[6]用低速锯取胫骨中段1/3，置于中性福尔马林固定24h，经酒精梯度脱水，特殊骨染料VillanuecaBoneStain染色2d，再逐级脱水及丙酮脱脂后，用甲基丙烯酸甲酯包埋不脱钙骨，再用低速锯锯成100μm的厚骨片，锯骨时从胫腓韧带联合近侧端以胫骨干下端与腓骨完全分离为有效骨片。胫腓骨结合处为第1片，接着往下依次为第2片和第3片，共锯3片。用磨沙玻璃将第2片磨成(20～30)μm的薄片，再进行酒精梯度脱水，过二甲苯两次，透明后树脂封片。　　1.3.3骨

8、片测量采用半自动数字化图像分析系统和测量软件(OsteoMeasure;OsteoMetrics,Inc,USA)用以测量骨形态计量学参数。胫骨上段松质骨静态参数包括骨小梁面积百分数(%Tb.Ar)、骨小梁