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时间:2018-11-01
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1、基质金属蛋白酶2在胆管癌组织中的表达及与预后的【摘要】目的:探讨基质金属蛋白酶2(MMP2)在胆管癌(CCA)组织中的表达及与预后的关系.方法:随机选取CCA患者106例,应用SP免疫组化方法检测MMP2蛋白的表达.其中89例术后随访1~60mo,分析MMP2蛋白与CCA患者预后的相关性.结果:MMP2蛋白在CCA组织中的阳性表达率为76.42%(81/106),并与CCA组织的临床病理学特征及患者的预后均有密切的关系.在发生肿瘤浸润、淋巴道转移及低分化的肿瘤组织中,MMP2蛋白高表达.此外,MMP2蛋白阳性表达的CCA患者的生存率明显低于阴性表达的患者(P<0.01)
2、.结论:MMP2蛋白的表达可能与CCA的浸润、转移有关;检测MMP2蛋白在CCA组织中的阳性表达率,并结合其临床病理学分级,可提高对患者预后的判断准确性.【关键词】基质金属蛋白酶类;胆管肿瘤;临床病理学;预后0引言肿瘤的侵袭、转移是恶性肿瘤的基本病理学特征,也是绝大多数肿瘤患者主要的死亡原因之一.同时,大量研究已证实恶性肿瘤的侵袭、转移与癌基因、生长基因及其受体基因的活化、抑癌基因的失活或丢失密切相关.因而,研究胆管癌(cholangiocarcinoma,CCA)的相关基因不仅有利于理解其发病机制,还可能发现在诊断和评价预后中具有临床意义的分子标记物.基质金属蛋白酶2(matrixm
3、etalloproteinase2,MMP2),又名明胶酶A,是基质金属蛋白酶家族的主要成员之一[1].已有多项研究表明,MMP2蛋白在乳腺癌、肝癌等多种肿瘤侵袭、转移中起关键作用,并可用于预测术后复发、转移[2-3].然而,关于MMP2蛋白的表达与CCA病程进展的关系鲜见报道.我们采用免疫组化方法检测106例CCA组织中MMP2蛋白的表达情况,探讨其与CCA发生、浸润、转移及预后的相关性.1材料和方法1.1材料我院普外科200002/200202经手术切除并经病理检查证实的胆管癌组织标本106(男57,女49)例;年龄50.1±13.7(27~79)岁.患者术前均未行化放疗.
4、对于有完整临床及随访资料的89例患者进行为期1~60mo的随访研究.对照组标本15例,为非肿瘤组织中的正常胆总管组织.鼠抗人MMP2mAb(工作浓度1∶100)和免疫组化采用的SP法试剂盒均购自北京鼎国生物技术有限公司.1.2方法采用免疫组织化学SP法染色,标本经40g/L中性多聚甲醛固定,石蜡包埋,4μm连续切片,70℃烤片15min.脱蜡至水,30mL/LH2O2灭活内源酶,PBS漂洗5min×3次.正常羊血清室温孵育15min.滴加20~30μLPBS稀释的一抗4℃过夜.PBS漂洗5min×3次.二抗(生物素标记的山羊抗鼠IgG,1∶500)于37℃孵育45min,PBS漂洗5min
5、×3次.DAB显色5~10min,自来水充分洗涤,苏木素复染5min,冲洗5min.脱水、透明、封片,镜检.设阳性对照,用PBS替代第一抗体作阴性对照.MMP2蛋白表达阳性为细胞质出现棕黄色颗粒,不出现者为阴性.在光镜下(400×)观察10个视野,每个视野计数100个细胞,阳性细胞计数打分标准如下:0分为阴性,1分为10%~50%细胞呈阳性表达,2分为51%~75%细胞呈阳性表达,3分为>75%细胞呈阳性表达.统计学处理:所有数据用SPSS12.0处理,计数资料采用χ2检验.生存分析用KaplanMeier法.P<0.05为差异具有统计学意义.2结果2.1MMP2蛋白表达及
6、其与CCA临床病理参数的关系免疫组织化学染色结果显示,在CCA组织中,MMP2蛋白的阳性表达主要定位于癌细胞质,呈弥漫分布的棕黄色颗粒.MMP2蛋白的阳性表达率为76.42%(81/106),而在正常胆总管组织中不表达.MMP2蛋白在CCA组织中的表达情况与患者临床病理参数之间的关系见表1.MMP2蛋白的表达与CCA分化程度、TNM分期、有无浸润转移有关.低分化及存在浸润转移的肿瘤组织中,MMP2蛋白的阳性表达率高于高、中分化(P=0.02)及未发生浸润转移者(P<0.01);TNMⅠ~Ⅱ期的CCA组织中MMP2蛋白的阳性表达率明显低于TNMⅢ~Ⅳ期的CCA组织(P=0.0
7、1).表1MMP2蛋白表达与CCA临床病理参数的关系2.2MMP2蛋白表达与CCA患者预后的关系本研究对89例CCA患者进行了术后随访研究.MMP2蛋白表达情况与患者术后生存率的关系分析如表2,图1所示.根据TNM分期和浸润转移情况分组的CCA患者中,有MMP2蛋白阳性表达的患者,其生存率则明显低于阴性表达者.从生存分析结果看,当MMP2蛋白阴性表达时,CCA患者的生存率高于MMP2蛋白阳性表达的
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