hplc法测定大黄微波提取物中大黄酸和番泻苷a的

《hplc法测定大黄微波提取物中大黄酸和番泻苷a的》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、HPLC法测定大黄微波提取物中大黄酸和番泻苷A的【摘要】目的建立大黄微波提取物中大黄酸、番泻苷A两种泻下成分的含量测定方法。方法采用HPLC法，色谱柱：PhenomenexGeminiC18柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相：甲醇0.1%磷酸（体积比80∶20），流速：1.0mL/min，检测波长：254nm，柱温：25℃。结果测定3批提取物，大黄酸和番泻苷A平均质量分数分别为7.24mg/g和10.28mg/g。结论本法简单快捷，结果可靠，可作为大黄提取物中大黄酸和番泻苷A的含量测定方法。【关键词】HPLC

2、法；大黄提取物；大黄酸；番泻苷A　　Abstract:ObjectiveTodeterminethecontentsofrheinandsennosideAinextractsofrhubarbpreparedicroplesenexGeminiC18(250mm×4.6mm，5μm)columnusingmethylalcohol0.1%H3PO4(80∶20)asmobilephase．ThefloL/minandUVdetection．Thecolumntemperatureg/gand10.28mg/g,rep

3、ectively．ConclusionThemethodissimpleandreproducible，palmatumL．)；大黄提取物（自制）。　　　　甲醇为色谱纯（Merk公司），超纯水为自制，其余试剂均为分析纯。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱：PhenomenexGeminiC18柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相：甲醇0.1%磷酸（体积比80∶20），流速：1.0mL/min，检测波长：254nm，柱温：25℃，进样量：20μL。理论塔板数以番泻苷A计算应不低于11000。　　2.2对照品

4、溶液的制备精密称取大黄酸对照品1.0mg、番泻苷A对照品10mg，分别置50mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别得到大黄酸对照品贮备液和番泻苷A对照品贮备液。进样前用0.45μm微孔滤膜滤过。精密吸取两种对照品贮备液各3mL，置同一个10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀,按“　　2.1”项下色谱条件进样，得对照品溶液色谱图，见图1。　　2.3供试品溶液的制备　　HPLC法测定大黄微波提取物中大黄酸和番泻苷A的含量精密称取大黄微波提取物适量(约含生药0.5g)，置具塞锥形瓶中，加入甲醇20mL，超声提取30min，滤

5、过。滤渣重新置具塞锥形瓶中，加入三氯甲烷20mL，超声再提取30min，滤过。滤渣加2.5mol／LH2SO415mL，电热套加热1h，冷却至室温，加入三氯甲烷15mL回流30min，冷却后置分液漏斗中，分出三氯甲烷液，重复萃取3次，合并三氯甲烷液，蒸馏水洗至中性，与水解前三氯甲烷提取液合并，回收三氯甲烷至干。残渣与甲醇提取液合并，加甲醇定容至100mL，得供试品溶液I，备用。进样前用0.45μm微孔滤膜滤过。精密量取上述供试品溶液Ⅰ10mL，定容至50mL，得供试品溶液Ⅱ。按“2.1”项下色谱条件，分别将供试品溶液Ⅰ和

6、供试品溶液Ⅱ进样，结果见图2。　　2.4线性关系考察精密吸取“2.2”项下两种对照品贮备液各1、2、3、4、5mL，依次置于5个10mL容量瓶，两对照品贮备液混合，加甲醇至刻度，摇匀。分别进样测定，以峰面积(A)对质量浓度(ρ)进行线性回归，得大黄酸的回归方程A=51132ρ-28610，r=0.9999，线性范围2.04～10.20mg/L；番泻苷A的回归方程A=170.29ρ-29.691，r=0.9997，线性范围20.2～101.1mg/L。　　2.5精密度试验取同一浓度的对照品溶液，连续进样6次，测定峰面积，计

7、算RSD值，得到大黄酸的RSD=0.03%，番泻苷A的RSD=0.43%。　　2.6重复性试验取供试品溶液Ⅱ和供试品溶液Ⅰ，各连续进样6次，分别测定大黄酸和番泻苷A的峰面积，计算RSD值，得到大黄酸的RSD=0.03%，番泻苷A的RSD=0.54%。　　2.7稳定性试验取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12h进样，分别测定大黄酸和番泻苷A的峰面积，计算RSD值，结果得到大黄酸的RSD=0.9%，番泻苷A的RSD=2.0%。表明样品溶液在12h内基本稳定。　　2.8加样回收率试验取已知浓度的大黄微波提取物适量，精

8、密称定，精确加入对照品，余同“2.3”项下操作，测定大黄酸和番泻苷A的峰面积，计算大黄酸和番泻苷A加样回收率，结果见表1。表1大黄酸和番泻苷A加样回收率（略）　　2.9样品测定取大黄微波提取工艺提取物3批，按“2.3”项下制备供试品溶液，依法测定。结果见表2。表2大黄提取物中大黄酸和番泻苷A含量（略）　　3讨论　　3