不同提取温度的五倍子主要化学成分hplc含量测定

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1、不同提取温度的五倍子主要化学成分HPLC含量测定和胜菲周国丽郑仕萍王芬范源*云南中医学院，云南昆明650500【摘要】目的：采用高效液相色谱法测定并分析不同提取温度对五倍子中单宁酸、五没食子酰基葡萄糖、没食子酸含量的影响。方法：以醋酸-醋酸钠缓冲溶液（pH4.0）为提取溶剂（液料比1∶100），分别在65、75、85、95℃中水浴3.5h，HPLC法测定含量。结果：在85℃温度提取条件下，三者可测得最大含量。结论：本实验初步提示提取五倍子中单宁酸、五没食子酰基葡萄糖、没食子酸的最佳提取温度为85℃，可为五倍子的实验研究和工艺研究提供一定参考。.jyqkm，5μm）

2、；流动相：纯净水（A）-甲醇（B）（20∶80）；流速：0.5ml/min；检测波长：275nm；柱温：25℃；进样量：2μl。2.1.2PGG色谱条件色谱柱：ZORBAXSB-C18柱（4.6×250mm，5um）流速：1.0ml/min；流动相：0.1%磷酸（A）-乙腈（C）（90∶10），进行梯度洗脱，0~15min，10%~25%C、15~15.10min，25%C、15.10~20min，25%C；检测波长：280nm；柱温：25℃；进样量：20μl。2.1.3没食子酸色谱条件色谱柱：ZORBAXSB-C18柱（4.6×250mm，5μm）流动相：0.2

3、%磷酸（A）-甲醇（B）（95:5）流速：1ml/min;检测波长：273nm；柱温：25℃；进样量：10μl。2.2对照品溶液制备2.2.1单宁酸对照品溶液制备精密称取单宁酸标准品0.44mg置于10ml容量瓶中，用50%的甲醇溶解定容至刻度，摇匀作为储备液。2.2.2PGG对照品溶液制备精密称取PGG标准品0.45mg，用80%甲醇溶解定容于10ml容量瓶中，摇匀即得。2.2.3没食子酸对照品溶液制备精密称取没食子酸标准品2.5mg置于10ml容量瓶中，再加入7ml乙醇、2.9ml水和0.1ml丙酮定容至刻度，摇匀即得。2.3供试品溶液制备用电子天平精密称取4

4、份0.2g五倍子粉末于4个250ml具塞锥形瓶中，加入20ml配好的pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲溶液，分别置于65、75、85、95℃恒温水浴锅中水浴加热水解3.5h，冷却过滤，精密量取滤液1ml于10ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀即得。2.4标准曲线绘制2.4.1单宁酸标准曲线制备精密称取单宁酸标准品2.58μg置于10ml容量瓶中，用乙醇、水、丙酮体积比为69.9%、29.8%、0.3%的溶液溶解并定容至刻度，摇匀。按“2.1.1”单宁酸色谱条件分别取2、4、6、8、10μl不同体积进样，以单宁酸的峰面积（Y）对标准品的质量（X）进行线性回归，得方程y=

5、5719.5x-1924.8（r=0.9974），结果表明：单宁酸峰面积值与质量有良好的线性关系，线性范围为0.516~2.58μg。2.4.2PGG标准曲线制备［10］精密称取单宁酸标准品8mg置于50ml容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度，摇匀。从中精密吸取10ml于25ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。按“2.1.2”PGG色谱条件分别取2、4、6、8、10、15μl不同体积进样，以PGG标准品质量为横坐标（X），峰面积峰值为纵坐标（Y），得回归方程为：Y=2420237X-18.445（r=0.9998），表明PGG在0.139~1.0428μg范围内线性

6、关系良好。2.4.3没食子酸标准曲线制备精密称取没食子酸标准品2.5mg置于25ml容量瓶中，用50%的甲醇溶解定容至刻度，摇匀。分别精密吸取0.1、0.5、1、2、4ml于10ml容量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即配制成浓度为1、5、10、20、40μg/ml的标准溶液。按“2.1.3”没食子酸色谱条件进样20μl，以没食子酸的峰面积（Y）对其浓度（X）进线性回归，得方程Y=114.7X+2.4554（r=0.9999），结果表明：没食子酸峰面积值与浓度有良好的线性关系，线性范围为1~10μg/ml。2.5含量测定分别取“2.3项”下方法制备的供试品溶液

7、，按“2.1”色谱条件分别测定单宁酸、五没食子酰基葡萄糖和没食子酸含量，用外标法进行计算。3结果由表1可知，在85℃时单宁酸、五没食子酰基葡萄糖（PGG）和没食子酸可测得最大含量。上述结果显示：85℃为单宁酸、五没食子酰基葡萄糖（PGG）和没食子酸的最适提取温度，并且五没食子酰基葡萄糖和没食子酸含量变化受温度影响较单宁酸大。4讨论中药成分复杂，在提取过程中应该尽可能多的提取出其有效活性成分，而在此过程中液料比、提取溶剂种类、提取温度、pH值等都可能会影响其含量。在五倍子中，单宁酸的提取方法主要有溶剂提取法、超声辅助法、加压提取法、超临界CO2萃取法，没食子酸提取有

8、酸水解法、