广州大学小鼠离体细胞培养实验报告

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1、广州大学综合设计性实验报告学院生命科学学院課程细胞生物学实验实验项目实验六细胞培养实验题目小白鼠肝细胞的原代培养专业生物技术年级、班别14>姓名陈子禧学号1414300004任课教师完成日期2016年5月23日［摘要］目的掌握小鼠肝细胞、表皮细胞的体外培养方法。采用脱臼法处死小鼠，用植块培养法（用眼科剪把肝组织剪成小于1mm3大小的植块，接种于培养瓶中进行体外培养；并用单细胞培养法（酶解法）进行肝细胞以及表皮细胞的培养。通过光镜观察细胞形态结果成功地培养出肝细胞、表皮细胞。肝细胞植块组在体外培养一个星期仍能够保持良好的生长状态。结论本实验成功地实现了肝细胞

2、的体外培养方法，尤其在植块培养组中效果更为明显。关键词原代培养小白鼠植块培养酶解法肝细胞表皮细胞目录1前言2实验原理3实验用品3.1试剂3.1.1培养液3.1.2Hank液3.2仪器3.3材料4实验方法4.1前期消毒灭菌4.2实验步骤5实验结果5.1.图片展示5.2.结果分析5.3结果汇总6结果分析与讨论7参考文献8致谢1前言目的了解肝细胞、表皮细胞原代细胞培养的基本方法及操作过程。学习植块培养法、单细胞培养法（酶解法）、营养液的配制及酸碱度的调节。初步掌握无菌操作方法。意义：细胞培养是当前细胞生物学乃至整个生命科学研宄与生物工程中最基本的实验技术。当前，

3、细胞培养技术广泛应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域，已发展成为一种重要的生物技术。［1］方法：采用肝组织块外植培养法通过无菌造作培养新生小鼠细胞。结果：运用这种方法成功地培养出原代肝细胞。结论：这种方法为广泛开展肝细胞原代培养奠定了基础。2实验原理原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），用植块培养法，在人工培养卞，使其不断地生长及繁殖。细胞培养是一种操作繁琐而乂要求十分严谨的实验技术。在准备过程中我们要是细胞能在体外长期

4、生长，必须满足两个基木要求：一.是供给细胞存活所必须的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其冇关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节。二.严格控制无菌条件。3实验用品3.1器材眼科剪（尖头、弯头）各一把、眼科镊（尖尖）一把、焙养皿一个、试管一支、（直、弯）吸管各一支、刻度吸管一支、吸管胶头三个、小烧杯一个、培养瓶一个等。上述器材均须彻底清洗、烤干、包装好，9.9X104Pa（15磅）灭菌30min,备用。此外，还有显微镜、酒精灯、酒精棉球、碘酒棉球、试管架、标记笔、恒温箱。3.2试剂3.2.1培养液RPMI-1640（

5、2-3ml/培养瓶），基础培养基80-90%、胎牛血清10-20%、双抗1-2%，主要提供生长因子和细胞因子。抗菌素：1万单位青、链霉素占1%。3.2.2组织清洗液hanks液、PBS（Phosphate-BufferedSal1ines）3.3材料小Q鼠幼体2只4实验方法4.1前期准备工作4.1.1对玻璃仪器进行清洗（1）浸泡：清水浸泡12小时（2）刷洗：清洁剂、毛刷刷洗，清洁剂清洗2次，自来水冲洗5次，烘箱50°C烘干（3）然后再浸入5%稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。（4）刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后

6、用烤箱烘干。（5）泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾120g:浓硫酸200ml:蒸馏水1000ml）浸泡12小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15次，最后蒸馏水冲洗3-5次和用双蒸水过3次。（6）烘干、包装：洗干净后先烘干，加脱脂棉，然后用纸包装。（7）高压消毒：包装好的器皿装入高压锅灭菌（8）烘干：50°C烘箱进行烘干。4.1.2对器械和无菌操作台进行消毒灭菌物理消毒火菌法（紫外线：进行30min照射，用于空气，操作台表面和不能使用其它法进行消毒的培养器皿；高压蒸气灭菌法：12PC,20min；干烤：160°C，2小时）；化学消毒灭菌法（75%酒精：主要

7、用于操作者的皮肤，操作台表面及无菌室内的壁面处理）；1%新洁尔灭：主要用于器械的浸泡及皮肤和操作室壁面的擦试消毒；抗生素：用于培养液火菌或预防培养物污染，如青霉素、庆大霉素等。6细胞原代培养（1）用洗涤剂刷洗双手一自来水冲净一新洁尔灭浸泡一进入无菌操作室。（2）操作前放入所需器具并进行30minUV火菌，操作者于超净台内用酒精棉消毒双手（切记：严禁将培养液（含有血清、蛋白等）在UV下进行灭菌。（3）打开试管、吸管胶头包装，将试管插（尽量斜插）入试管架.（4）取出需用的吸管（直、弯吸管各一支，刻度吸管一支）套上胶头，将试管插入相应的试管中。（5）打开培养皿以

8、及解剖工具手持端的包装。（6）在小组其他成员己打开腹腔的棊础上切取