中药夏枯草对甲状腺癌sw579细胞的抗增殖作用

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1、中药夏枯草对甲状腺癌SW579细胞的抗增殖作用蒙雯雯1黄雪梅2卢德成1（通讯作者）罗佐杰1（1广丙医科大学第一附属医院内分泌科广丙南宁530021）（2南宁市第一人民医院内分泌科广丙南宁530021）【摘要】目的探讨中药夏枯草对甲状腺癌细胞的抗增殖作用。方法不同浓度的夏枯草作用于人甲状腺鳞癌SW579细胞48h后，采用MTT法计算出夏枯草对SW579的半数抑制浓度（IC50）；将实验分为夏枯草0.5IC50组、IC50组、2IC50组、阴性对照组组四个组，将各浓度组药物分别作用于SW579细胞48h后，倒置相差显微镜下观察各

2、组药物作用于SW579后细胞的形态学变化；Westernblot检测各组c-myc蛋白的表达。结果夏枯草对SW579细胞的IC50为21mg/ml;且随着药物浓度的增加，抗增殖作用增强；c-myc蛋白的表达随着药物浓度的增加，表达量减少。结论夏枯草能有效抗甲状腺癌细胞的增殖，为中药治疗甲状腺癌提供理论依据。【关键词】夏枯草甲状腺癌细胞c-myc细胞增殖【中图分类号】R242【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）08-0074-03甲状腺癌是内分泌系统最常见的恶性肿瘤之一[1]。夏枯草在临床上应用己经有很久

3、的历史，具有清热解毒、软坚散结等功效，现代中医临床及实验研究表明，夏枯草对食管癌、肝癌、乳腺癌、胃癌、淋巴瘤等肿瘤具有较好的临床疗效。研究表明，抗肿瘤细胞增殖与诱导细胞凋亡是夏枯草抗肿瘤作用机制之一[2]。原癌基因c-myc及其表达产物在细胞增殖、分化、转化和诱导细胞凋亡等多个环节起到调节作用，在多种肿瘤形成过程中处于重要地位[3,4],c-myc的过度表达是许多肿瘤的特征。木实验研宄以甲状腺癌SW579细胞为研究对象，初步探讨不同浓度的夏枯草对甲状腺癌SW579细胞的抗增殖作用及细胞内c-myc蛋白的表达情况。1材料和方法

4、1.1实验材料甲状腺癌SW579细胞购自中科院上海细胞所。主要试剂及配制：夏枯草提取物：夏枯草40g加水400ml,煮沸30min后过滤除渣，此吋滤液浓度为lg/ml,经120°C30min高压火菌后，用直径0.22μl的微孔滤膜正压过滤，使用吋用L-15培养基稀释至所需浓度。培养基L-15培养基购自博士德生物公司，胎牛血清购自杭州四季青生物公司，兔抗人c-myc抗体购自CellSignaling公司，辣根过氧化酶标记山羊抗兔IgG购自SantaCruz公司，β-actin单克隆抗体购自上海康成有限公司，垂直

5、电泳槽及电转槽为美国Bio-Rad公司，酶标仪为美国Bio-RadiMARK。1.2方法1.2.1细胞培养及实验分组人甲状腺癌SW579细胞于含10%胎牛血清的L-15培养基中培养，置于37°C无CO培养箱内培养。实验组分4组：低浓度组：浓度为0.5IC50的夏枯草提(2)取液；中浓度组：IC50夏枯草提取液；高浓度组：该组药物浓度为2IC50夏枯草提取液；阴性对照组：培养液中只有细胞无药物。1.2.2夏枯草IC50的计算将处于对数生长期的细胞消化后制成单细胞悬液，密度为8×104个/ml接种于96孔板中，100

6、μl/孔。细胞培养24h后，加入夏枯草提取液,使夏枯草终浓度为2,20,40,80,200mg/mlo48h后倒置相差显微镜下观察细胞的形态，用PBS小心漂洗2次，每孔加入完全培养基100μl,MTT10μl。继续培养4h后吸弃上清，每孔加入DMS0100μl，于全自动酶标仪上震荡lOmin使结晶完全溶解，在波长490nm下测定吸光度A值，按下列公式计算细胞的增殖抑制率：细胞增殖抑制率=(1—实验组A/对照组A)×100%。计算出两种药物的半数抑制浓度IC50。1.2.3MTT法检测各药物

7、组细胞增殖抑制率MTT法检测药物处理48h后低浓度组、中浓度组、高浓度组、阴性对照组中细胞的增殖抑制率，倒置相差显微镜下观察细胞生长状态。1.2.4Westernblot检测c-myc表达情况分别收集各浓度组细胞，约l×106个细胞加入100μl裂解液，冰上吹打裂解30mino4°C,12000r/min,离心30min,小心吸取上清液即为细胞总蛋白提取液。测定蛋白浓度，依据蛋白浓度上样，SDSPAGE凝胶双向电泳，将胶上蛋白电转移至硝酸纤维膜上，以兔抗人c-myc抗体为•一抗，辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔

8、IgG为二抗，以β-actin为内参，进行免疫印迹分析，ECL显色于胶片上，Quantityone图像分析软件进行定量分析。1.3统计学处理采用SPSS13.0统计软件进行分析，数据以(x-±S)表示，组间比较采用单因素方差分析，LSD法对各组数据进行两两比较，检验