土鳖虫多肽溶液抗肿瘤作用研究

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1、土鳖虫多肽溶液抗肿瘤作用研究【】目的：研究土鳖虫多肽溶液抗肿瘤作用。方法：以H22肿瘤小鼠为动物模型，给药10天后处死，取肿瘤、脾脏、胸腺并称重，计算抑瘤率、脾脏系数和胸腺系数；取肝脏检测MDA水平和SOD活性。结果：土鳖虫多肽溶液对H22肿瘤小鼠的抑瘤率为46.79%，脾脏系数和胸腺系数均较模型对照组升高（P<0.05）；土鳖虫多肽能使肿瘤小鼠肝脏MDA水平降低和SOD活性升高，与模型组比较有差异（P<0.05）。结论：土鳖虫多肽溶液对H22肿瘤小鼠有抗肿瘤作用。　　【关键词】土鳖虫；多肽；抗肿瘤　　　　anti-tumoreffectofEupolyphagesinensis

2、edical,JiujiangUniversity,Jiujiang,332000)　　【Abstract】AbjectiveTostudytheanti-tumoreffectofEupolyphagesinensisethodsThetumormodelinmiceent,themiceusabearingmiceusindexodelcontrolgroup(P<0.05);TheMADlevelodelcontrolgroup(P<0.05).ConclusionEupolyphagesinensisDA）检测试剂盒、超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒（南京建成生物工程研

3、究所）。　　1.3动物　　昆明小鼠，雄性，体重21~25g，清洁级，由汕头大学医学院动物中心提供；H22瘤株（本实验室保存）。　　1.4仪器　　水浴锅（常州国华仪器有限公司），离心机（Eppendorf公司），酶标仪（Thermo公司）。　　1.5方法　　1.5.1土鳖虫多肽溶液及土鳖虫水提液的制备　　取新鲜冻存的土鳖虫，自来水洗净，再用0.01mol/L的磷酸盐缓冲液（pH7.4）冲洗后，按质量体积1：2加入0.01mol/L的磷酸盐缓冲液（pH7.4），用高速组织捣碎机匀浆，9000rpm离心15min取上清，在最佳酶解条件下用木瓜蛋白酶酶解（另文发表）土鳖虫匀浆上清液，酶解

4、结束后9500rpm离心15min取上清，即得土鳖虫多肽溶液。上述土鳖虫匀浆上清液，即为土鳖虫水提液。　　1.5.2土鳖虫多肽溶液对H22肿瘤小鼠的抑瘤作用　　无菌条件下取腹腔接种H22肿瘤小鼠的腹水，用生理盐水调节肿瘤细胞浓度为1×107个/ml，按0.2ml每只老鼠的剂量接种于昆明小鼠右腋皮下，接种次日将接种肿瘤的小鼠随机分为：模型对照组、土鳖虫多肽组、土鳖虫水提液组和环磷酰胺组，每组10只，另取10只未接种肿瘤的小鼠作为空白对照组。模型对照组每日灌胃给予0.1ml/10g生理盐水，土鳖虫多肽组每日灌胃给予20g/kg（以生药量计算）的土鳖虫多肽溶液，土鳖虫水提液组每日灌胃给

5、予20g/kg（以生药量计算）的土鳖虫水提液，环磷酰胺组每两日腹腔注射20mg/kg环磷酰胺。共给药10天，于末次给药24h后脱颈椎处死。取瘤块、脾脏、胸腺并称重，计算并比较各组抑瘤率和器官系数。抑瘤率/%=（对照组平均瘤重-给药组平均瘤重）/对照组平均瘤重×100%，器官系数=器官重量/动物体重（g/kg）。　　1.5.3土鳖虫多肽溶液对H22肿瘤小鼠肝脏MDA水平和SOD活性的影响取小鼠肝脏匀浆后离心取上清，根据说明书操作步骤检测MDA水平和SOD活性。　　2结果　　2.1土鳖虫多肽溶液对H22肿瘤的抑瘤作用　　由表1可以看出，土鳖虫多肽组和土鳖虫水提液组抑瘤率分别为46.7

6、9%和32.15%，平均瘤重均小于模型对照组，差异有显著性，且土鳖虫多肽组与水提液组比较也有差异。　　关于脾脏系数和胸腺系数，土鳖虫多肽组与模型对照组比较有差异，均有升高；土鳖虫水提液组差异不显著；环磷酰胺组与模型对照组比较有差异，均降低。　　2.2土鳖虫多肽溶液对H22肿瘤小鼠肝脏MDA水平和SOD活性的影响　　由表2可以看出，各组肿瘤小鼠肝脏MDA水平均较空白对照组高，而SOD活性则均较空白对照组低，说明H22肿瘤对小鼠肝脏有一定程度的损伤。土鳖虫多肽组小鼠肝脏MDA水平较模型对照组低，SOD活性较模型对照组高，说明土鳖虫多肽能使小鼠肝脏抗氧化活性得到恢复，缓解自由基对肝脏的

7、氧化损伤。　　3讨论　　本实验采用筛选药物常用的H22动物移植瘤模型给药10天，结果显示土鳖虫酶解多肽对H22肿瘤抑制效果明显。　　蛋白质不完全水解后产生的一些肽段可能具有比其前体更强的生物活性。本实验中，土鳖虫匀浆上清液即水提液酶解后获得的多肽溶解较未酶解的抑瘤效果明显，说明土鳖虫水提液中某些蛋白质经蛋白酶水解后，抗肿瘤效果更明显；并且对增加肿瘤小鼠免疫器官重量和增强肝脏抗氧化能力方面均有明显提高。　　机体的免疫功能与肿瘤的发生、发展有密切关系，肿瘤细胞的增殖通常伴有免疫应答的