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《人结直肠肿瘤cd47阳性细胞亚群免疫特性的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、人结直肠肿瘤CD47阳性细胞亚群免疫特性的研究马丽君1刘婷1李海2李玉奎1（通讯作者）（1宁夏医科大学总医院干细胞研究所宁夏银川750004）（2宁夏医科大学总医院结直肠外科宁夏银川750004）【摘要】目的：从人结直肠肿瘤组织中分离培养CD47阳性肿瘤细胞并研究其免疫学特性。方法：无血清培养法对原代培养细胞进行筛选培养，采用有限稀释法筛选分离具有连续克隆能力的单细胞，流式细胞仪分选出细胞表面标记CD47阳性的细胞亚群；分离正常人外周血T淋巴细胞经PHA活化，实验分为3组：①空白对照组，②与CD47阳性肿瘤细胞（1:10）共培养组，③抗CD47单克隆抗体组（lμ
2、g/ml,5μg/ml,10μg/ml,20μg/ml）;MTT法检测培养72h后各组T细胞的增殖水平，EUSA法测定各组细胞培养液中IL-12、IFN-γ、TNF-α的表达量。结果：三例原代培养的肿瘤细胞在无血清培养基中能够形成肿瘤球并获得可持续传代的克隆细胞；能够形成肿瘤球的原代培养细胞中CD47阳性细胞所占比例分别为99.8%,97.2%和99.9%；与活化的人T淋巴细胞共培养，加入（10μg/ml和20μg/ml）抗CD47单克隆抗体组比CD47阳性细胞组T细胞具有较强的增殖能力（P<0.05）,20&mu
3、;g/ml浓度组与10μg/ml浓度组比较无统计学差异（P〉0.05）;ELISA检测CD47阳性细胞组培养液中IFN-γ含量较空白对照组明显降低（P<0.05）,而IL-12、TNF-&alPha;的表达量与空白对照组比无明显差异（P〉0.05）。结论：人结直肠肿瘤CD47阳性细胞亚群能抑制活化的T淋巴细胞增殖并抑制其释放IFN-γ,为结直肠癌的靶向治疗提供实验依据。【文献标识码】A【关键词】结直肠肿瘤；CD47；免疫逃逸【中图分类号】R73-3【文章编号】2095-1752(2016)14-0060-03ImmunologicalCh
4、aracteristicsofCD47+TumorStemCellsinHumanColorectalCarcinomaMALi-junl,UU-Tingl,Ll-Hai2,LIYu-kuil,(1.NingxiaHumanStemCellInstitute,theGeneralHospitalofNingxiaMedicalUniversity,Yinchuan,Ningxia750004,P.R.China;2.SurgicalDepartmentofColon,theGeneralHospitalofNingxiaMedicalUniversity,Yinchu
5、an,Ningxia750004,P.R.China)【Abstract】ObjectiveToisolateCD47+coloncancercellsfromhumancolorectalcarcinomaandstudytheimmunologicalcharacteristicsinvitro.MethodsPrimarycolorectalcarcinomacellswereculturedinserumfreeconditionswhichgiverisepreferentiallytoself-renewalstemcellspheres.Theexpre
6、ssionofCD47wasanalyzedbyflowcytometry.PeripheralbloodTlymphocytesandCD47+cellswereco-culturedwiththeindicatedantibodiesthroughinvitroMTTassay.TheexpressionsofIL-12、IFN-γ、TNF-αineachgroupwereanalyzedbyELISAassay.ResultsThreeprimarycolorectalcarcinomacellsgrewintotumorspheres.
7、TheCD47expressionsofeachcloneare99.8%，97.2%and99.9%.TheproliferationofperipheralbloodTlymphocytesoftheexperimentalgroups(10and20μg/mL)increasedsignificantlycomparedwiththeCD47+tumorcellgroup(P<0.05).Statisticalanalysisshowedthatnosignificantdifferencewasfoundbetweenthetwogro
