天南星类中药材的page鉴别

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1、天南星类中药材的PAGE鉴别　　　应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称PAGE)技术，对天南星类中药材进行鉴别分析结果表明：三种天南星药材样品的PAGE图谱完全不同，可作为天南星类中药材鉴别的一种有效方法。Abstract:　　PolyacrylamideGelelectrophoresis［PAGE］inethetraditionalChinesemedicinalmaterialsofthreekindsArsaemaconsangumeumSchott.ResultsShofromconfusablevarieties

2、.　　KeyaconsangumeumSchott.Arisaemaheterophyllumbi.　　pinelliapeclatisectaSchott.PAGEidentification.　　天南星主要用于祛风定惊，散结化痰。外用可治疗疮疡肿毒、蛇虫咬伤。近年来临床上用于治疗宫颈癌，有很好的疗效。因天南星药材亲缘关系相近，性状种别相似，用常规的性状显微鉴别方法很难鉴别分析。探究表明，天南星药理功能的主要有效成分含有蛋白质，故可应用PAGE技术对其进行鉴别［1］［2］。现报道如下。　　1　实验材料和仪器　　天南

3、星(ArisaemaConsanguineumSchott)样品Ⅰ、异叶天南星(ArisaemaheterophyllumBi)样品Ⅱ、虎掌(掌叶半夏)(PinelliapeclatisectaSchott)样品Ⅲ，以上样品均为鲜品，由湖北中医学院药学系鉴定教研室鉴定并提供。　　DYY-Ⅲ4型双稳电泳仪、DYY-Ⅲ28型垂直板型电泳槽(北京六一仪器厂)。　　2　试剂的配制和凝胶的制备　　2.1　试剂配制　　A：36.6g三羟甲基氨基甲烷(Tris)，48ml，1mol/L的Hcl加水到1000ml;B：5.98Tri

4、s,48ml,1molHcl加水到100ml；C：30g丙烯酰胺(Acr)，0.8g甲叉双丙烯酰胺(Bis)加水到100ml过滤后使用；D：10gAcr,2.5gBis加水到100ml过滤后使用；E：4mg核黄素加水到100ml；F：40%(ED)、混合后立即装进槽中，胶液加到距玻璃板顶部3cm处(注重排除可能存在的气泡)，上面再加约4mm厚的水层以隔尽空气并使胶面平坦。　　2.2.3　浓缩胶的制备　　将试剂B∶D∶E∶F按1∶2∶1∶4的比例(V/V)混合，然后按每ml胶液1.5μl的比例加进TEMED。然后再加到

5、吸往表面水层的分离胶上部，高约3cm，并放好样品槽模板(俗称梳子)，光照聚合，聚合约需30～40分钟，胶聚合后，小心取出“梳子”，加进上槽电极缓冲液备用。　　3　样品液的制备　　精确称取样品Ⅰ2g加0.9%的生理盐水4ml研磨成浆后置离心管中离心15分钟(3000rpm/min)，取上清液2ml加进4ml丙酮沉淀离心，倾出上清液，将沉淀加2ml蒸馏水溶解后装进半透膜袋中透析48小时(其间更换蒸馏水数次)，即得样品液Ⅰ，置冰箱中备用。用同样的方法处理Ⅱ、Ⅲ号样品。　　4　点样　　用微量注射器分别吸取Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号样品液各

6、25μl注进到样品槽内的电极缓冲液和浓缩胶之间界面上。并在上槽缓冲液中加进1～3滴溴酚蓝指示剂示踪。　　5　电泳　　加样后，向两槽内注进电极缓冲液，接通电源立即电泳。前后两槽分别接进电源的负、正极上，开始电流调节为9mA,当样品进进分离胶后，加大电流至12mA，当指示剂到达凝胶未端约1cm时，停止电泳。　　6　染色　　取出胶板后，放进0.2%的考马斯亮蓝(R250)染色液中，在36°C下染色1小时，用蒸馏水冲往凝胶表面附着的染料，再用含20%甲醇和7%醋酸的脱色液脱色，经常更换脱色液，直至背景清楚为止。　　7　结果和

7、讨论　　PAGE技术操纵简便，重现性良好，凝胶本身有较强的机械强度，在本实验中我们曾做过数次重复，所得电泳图谱稳定可靠，此外，采用垂直板型PAGE，操纵及制胶板方便，并可在一块胶上(120mm×100mm×1.5mm)同时进行十几种样品的PAGE分析，且样品和试剂用量少，符合多快好省的要求，非凡适用于含有蛋白质成分的各类中药材(如：果实种子类、根皮类及动物类中药)的质量分析及真伪鉴别。