医药学药学毕业论文 天南星类中药材的page鉴别

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1、湖南师范大学本科毕业论文考籍号：XXXXXXXXX姓名：XXX专业：医药学药学论文题目：天南星类中药材的PAGE鉴别指导老师：XXX二〇一一年十二月十日　　摘要　应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称PAGE)技术，对天南星类中药材进行鉴别分析结果表明：三种天南星药材样品的PAGE图谱完全不同，可作为天南星类中药材鉴别的一种有效方法。Abstract:　　PolyacrylamideGelelectrophoresis［PAGE］wasusedtodeterminethetraditionalChines

2、emedicinalmaterialsofthreekindsArsaemaconsangumeumSchott.ResultsShowedthattheirPAGEbandswerealwaysquitedistinct,whichcanbeusedtoassesstheirquatityanddistinguishthemfromconfusablevarieties.　　Keywords:ArisaemaconsangumeumSchott.Arisaemaheterophyllumbi.

3、　　pinelliapeclatisectaSchott.PAGEidentification.　　天南星主要用于祛风定惊，散结化痰。外用可治疗疮疡肿毒、蛇虫咬伤。近年来临床上用于治疗宫颈癌，有很好的疗效。因天南星药材亲缘关系相近，性状类别相似，用常规的性状显微鉴别方法很难鉴别分析。研究表明，天南星药理作用的主要有效成分含有蛋白质，故可应用PAGE技术对其进行鉴别［1］［2］。现报道如下。　　1　实验材料与仪器　　天南星(ArisaemaConsanguineumSchott)样品Ⅰ、异叶天南星

4、(ArisaemaheterophyllumBi)样品Ⅱ、虎掌(掌叶半夏)(PinelliapeclatisectaSchott)样品Ⅲ，以上样品均为鲜品，由湖北中医学院药学系鉴定教研室鉴定并提供。　　DYY-Ⅲ4型双稳电泳仪、DYY-Ⅲ28型垂直板型电泳槽(北京六一仪器厂)。　　2　试剂的配制与凝胶的制备　　2.1　试剂配制　　A：36.6g三羟甲基氨基甲烷(Tris)，48ml，1mol/L的Hcl加水到1000ml;B：5.98Tris,48ml,1molHcl加水到100ml；C：30g

5、丙烯酰胺(Acr)，0.8g甲叉双丙烯酰胺(Bis)加水到100ml过滤后使用；D：10gAcr,2.5gBis加水到100ml过滤后使用；E：4mg核黄素加水到100ml；F：40%(W/V)的蔗糖溶液；G：0.56g的过硫酸铵加水到100ml(AP溶液)；H：6gTris,28.8g甘氨酸加水到1000ml，使用时稀释10倍，此为电极缓冲液。　　2.2　凝胶的制备及电泳槽的安装［3］　　2.2.1　本实验采用垂直板电泳槽　凝胶模子是由两块玻璃装入一个用硅酮橡胶做成的夹套内构成，玻璃板厚2mm

6、，两玻璃板之间由夹套隔开厚约1.5mm，胶就在这两板之间的胶室内聚合成平板胶。安装电泳槽时，玻璃板先用热的去污剂刷洗或洗液浸泡，然后用热水冲洗，再用蒸馏水冲洗，直立干燥。勿用手指接触洗净的玻璃板面，将两块玻璃板装入橡胶夹套内，然后垂直地装入两个半槽之间，用螺丝将两个半槽固定在一起，注意在上螺丝时，要按照一定的顺序一个个的逐步柠紧，均匀用力。电泳槽装好后将熔化的1.5%的琼脂注入背面槽内的小池中，使在胶池的下部凝结成约0.5cm厚的琼脂层，备用。　　02.2.2　分离胶的制备　　将试剂A∶C∶水∶

7、G按1∶2∶1∶4的比例(V/V)混合，然后按每ml胶液0.6μl的比例加入加速剂四甲基乙二胺(TEMED)、混合后立即装入槽中，胶液加到距玻璃板顶部3cm处(注意排除可能存在的气泡)，上面再加约4mm厚的水层以隔绝空气并使胶面平坦。　　2.2.3　浓缩胶的制备　　将试剂B∶D∶E∶F按1∶2∶1∶4的比例(V/V)混合，然后按每ml胶液1.5μl的比例加入TEMED。然后再加到吸去表面水层的分离胶上部，高约3cm，并放好样品槽模板(俗称梳子)，光照聚合，聚合约需30～40分钟，胶聚合后，小心取

8、出“梳子”，加入上槽电极缓冲液备用。　　3　样品液的制备　　精确称取样品Ⅰ2g加0.9%的生理盐水4ml研磨成浆后置离心管中离心15分钟(3000rpm/min)，取上清液2ml加入4ml丙酮沉淀离心，倾出上清液，将沉淀加2ml蒸馏水溶解后装入半透膜袋中透析48小时(其间更换蒸馏水数次)，即得样品液Ⅰ，置冰箱中备用。用同样的方法处理Ⅱ、Ⅲ号样品。　　4　点样　　用微量注射器分别吸取Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号样品液各25μl注入到样品槽内的电极缓冲液与浓缩胶之间界面上。并在上槽缓冲液中加入1～3滴溴酚蓝指示剂示