dads抑制sw480细胞系生长增殖的相关蛋白质分子鉴定(1)

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1、密级分类号UDC编号南华大学申请硕士学位论文DADS抑制SW480细胞系生长增殖的相关蛋白质分子鉴定研宄生姓名：赵其辉指导教师姓名、职称：贺修胜教授学科、专业名称：病理学与病理生理学研究方向：肿瘤病因发病学与防治2007年10-24月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研宄成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确

2、的说明。作者签名口期：年月口关于学位论文使用授权说明本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文;学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。作者签名:导师签名:日期:.8111218242627.34.41.42.4546一、中文摘要...二、英文摘要...三、正文刖目技术路线...材料与方法结果i寸论结论参考文献...四、综述五、附录一......六、附录二七、附录三......八、致谢

3、......NO.01B016)NO.Y02-069)NO.03JJY3029)02SSY4004)本研究基金资助项目湖南省教育厅课题基金项目（课题编号:湖南省卫生厅课题基金项目（课题编号:自然科学基金课题基金项目（课题编号:湖南省科技厅课题基金项目（课题编号:DADS抑制SW480细胞系生长增殖的相关蛋白质分子鉴定硕士研宄生：赵其辉导师：贺修胜教授摘要0的：本室前期应用比较蛋白质组学，从DADS处理的SW480细胞系中，筛出了一些具有潜在应用价值的差异蛋白质分子。本实验就部分差异表达蛋白质进行进一步分析与鉴定，因此，我们选

4、择泛肽、CK19和FKBP蛋白质进行验证，为下一步的实验研究奠定坚实的基础。方法：采用MTT实验、细胞计数法，观察不同浓度和作用时间DADS对SW480细胞的生长抑制作用；施用流式细胞仪，分析50Mg/mlDADS对SW480细胞的周期分布及凋亡率的影响；运用RT-PCR方法，检测CK19mRNA表达水平；用免疫印迹方法，分析50Mg/mlDADS处理SW480细胞系后泛肽、CK19和FKBP的表达水平。结果：MTT比色法检测显示，DADS能明显抑制SW480细胞系生长増殖，呈浓度和时间依赖性，SW480细胞系经25pg/m

5、l，35^ig/ml,50pg/ml和70(ig/mlDADS处理48h,其细胞生长增殖抑制率分别为18.67%、33.02%、49.12%和66.86%，细胞生长增殖速度明显较对照组慢，差异有显著性意义(P<0.05)。细胞计数结果表明，SW480细胞群体倍增时间为30.81h，而当DADS的浓度由25(ig/ml增加到70pg/ml时，其细胞群体倍增时间由34.68h延长至96.33h，与对照组比较，差异有显著性意义(P<0.05)。流式细胞仪分析结果显示，50

6、ig/mlDADS将SW480细胞阻滞在G2/M期，并使细

7、胞凋亡率增加。应用半定量RT-PCR检测CK19的基因mRNA表达水平，结果证实，50pg/mlDADS处理SW480细胞后，CK19mRNA表达较对照组降低，差异存显著性意义(P<0.05);Westernblotting分析结果显示，50(ig/mlDADS处理SW480细胞48h,泛肽表达较对照组增强，而CK19和FKBP的表达明显降低,差异均为2倍以上。结论：1.DADS能抑制SW480细胞系的生长增殖，J1呈剂量依赖效应。2.DADS抑制SW480细胞系生长增殖，可能与泛肽表达卜.调，CK19和FKBP表达下调，将

8、细胞阻滞在G2/M期及促进细胞凋亡冇关。关键词：DADS；SW480细胞；泛肽；CK19；FKBPIdentificationofproteinsassociatedwithproliferationinhibitioneffectsbyDADSinSW480celllineAbstractObjective:Somevalubledifferentiatedproteinswerescreenedinpreviousinvestigationusingcomparableproteomicstechnique.Toensu

9、retheconfidenceoftheprimaryproteomicresultsandthedifinitionofthesequenceinvestigation,Ubiquitin,CK19andFKBPweretestedagainanditsfunctionwereanaly