淡水贝类多糖提取工艺的优选

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1、淡水贝类多糖提取工艺的优选刘小燕，李朝品，湛孝东【关键词】贝类多糖；,,提取；,,正交实验　　摘要：目的优选淡水贝类多糖的最佳提取工艺。方法采用水提法，以多糖含量为指标，利用正交实验法对提取过程中的醇沉浓度、浸提温度、浸提比及浸提时间4个因素进行优选研究。结果最佳提取条件为：加无水乙醇至醇沉浓度为75%，浸提温度60℃，浸提比1∶2，浸提时间6h。结论优化的淡水贝类水提醇沉工艺简便，合理，可行。　　关键词：贝类多糖；提取；正交实验　　Abstract：ObjectiveTooptimizetheextractionprocessofshellfishp

2、olysaccharide.MethodsTakingthecontentofpolysaccharideasanindex,fourtechnologicalfactorsofperature,eusedandextractiontimeizedbyorthogonaltest.ResultsTheidealextractionprocesses;eachextractionrunning6hours.ConclusionTheoptimumextractingproceduresimple,reasonableandreliable.　　KeyMo

3、llusca），腹足纲（Gastropoda），前鳃亚纲（Prosobranchia），中腹足目（Mesogastropoda），田螺科（Viviparidae），圆田螺属(CipangopaludinaHannibal)。《本草纲目》记载“田螺利湿清热，止渴醒酒，利大小便；治脚气、黄疸”。民间根据田螺有“清湿热、利小便”等之作用，常应用于治疗小便不畅、黄疸、中耳炎、痔疮等症。近年，有关贝类多糖的研究证实其具有抗肿瘤、抗病毒、抗凝血、降血脂、降血糖等多种生物学活性〔2〕，引起了学术界关注。贝类多糖的提取方法通常有水提法、碱提法和酶提法〔3〕，但是各种方

4、法提取的最佳条件尚有待探讨。本实验采用水提法提取，进行了醇沉浓度、浸提温度、浸提比及浸提时间四因素三水平的正交实验，以找出一种最佳的提取方案，为进一步研究贝类多糖活性奠定基础。　　1器材　　1.1原料中国圆田螺，当地采集。　　1.2仪器和试剂无水乙醇（蚌埠化学试剂厂，AR），丙酮（江苏省宜兴市展望化工试剂厂，AR），高速组织捣碎机（上海标本模型厂），高速离心机，恒温磁力搅拌器(国华电器有限公司)，DZF6030A真空干燥箱（上海一恒科技有限公司），721分光光度计。　　2方法与结果　　2.1影响淡水贝类多糖提取主要因素的选择根据文献报道，影响水浸提多糖

5、的因素主要有醇沉浓度、浸提温度、浸提比、浸提时间等，本实验对醇沉浓度、浸提温度、浸提比、浸提时间等因素采用正交实验法进行优选。因素水平设计见表1。选用L9(34)正交表，实验安排见表2。　　2.2正交实验设计取中国圆田螺9份，清洗去壳每份取螺肉200g，匀浆过滤后按正交方案（表2）进行水提、醇沉，沉淀分别用适量无水乙醇、乙醚、丙酮依次洗涤去脂后干燥。　　表1淡水贝类多糖提取的因素水平（略）　　2.3淡水贝类粗多糖含量测定以葡萄糖为标准品，采用苯酚－硫酸法测定淡水贝类粗多糖的多糖含量〔4〕。　　2.3.1总糖含量标准曲线的绘制精密称取105℃下干燥至恒重

6、的葡萄糖约60mg，置100ml量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得葡萄糖标准溶液。精密吸取葡萄糖标准溶液0.0、0.1，1.5，2.0，2.5，3.0ml分别置于50ml容量瓶中，加蒸馏水定容。精密移取上述溶液各2ml，然后分别加入5%苯酚1ml，摇匀后迅速加入浓硫酸7ml，5min后置沸水浴中加热30min，取出置冷水中冷却。用分光光度计在波长490nm处测定吸光度A。以A值对浓度C绘制标准曲线，进行线性回归，得标准曲线方程：A=0.0545+0.0242C，r=0.9995。　　2.3.2精密度实验精密移取葡萄糖标准溶液2ml，共5份，按

7、标准曲线项下方法操作测得平均吸光度为0.2845，相对标准差（RSD）为2.62%，结果表明精密度符合要求。　　2.3.3稳定性实验精密移取样品液，按标准曲线项下方法操作，每10min测1次吸光度，到1h后改为30min测1次，120min内测490nm处测定吸光度8次得出RSD为2.43%，结果表明测定值在120min内保持稳定。以下吸光度的测定均在120min内完成。　　2.3.4供试液总糖含量测定精密量取淡水贝类粗多糖10mg置10ml容量瓶中加蒸馏水稀释至刻度得供试液。取供试液各2ml，按“总糖含量标准曲线”项下操作，测定A值并代入回归方程计算

8、多糖含量。　　2.4实验结果及方差分析结果结果见表2~3。　　表2正交实验的设计与结果（略）