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时间:2018-11-10
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1、淡水贝类多糖提取工艺的优选作者:刘小燕,李朝品,湛孝东【关键词】贝类多糖;,,提取;,,正交实验 摘要:目的优选淡水贝类多糖的最佳提取工艺。方法采用水提法,以多糖含量为指标,利用正交实验法对提取过程中的醇沉浓度、浸提温度、浸提比及浸提时间4个因素进行优选研究。结果最佳提取条件为:加无水乙醇至醇沉浓度为75%,浸提温度60℃,浸提比1∶2,浸提时间6h。结论优化的淡水贝类水提醇沉工艺简便,合理,可行。 关键词:贝类多糖;提取;正交实验 Abstract:ObjectiveTooptimizetheextractionprocessofshellfishpolysaccharide.
2、MethodsTakingthecontentofpolysaccharideasanindex,fourtechnologicalfactorsofperature,eusedandextractiontimeizedbyorthogonaltest.ResultsTheidealextractionprocesses;eachextractionrunning6hours.ConclusionTheoptimumextractingproceduresimple,reasonableandreliable. KeyMollusca),腹足纲(Gastropoda),前鳃亚纲(Pr
3、osobranchia),中腹足目(Mesogastropoda),田螺科(Viviparidae),圆田螺属(CipangopaludinaHannibal)。《本草纲目》记载“田螺利湿清热,止渴醒酒,利大小便;治脚气、黄疸”。民间根据田螺有“清湿热、利小便”等之作用,常应用于治疗小便不畅、黄疸、中耳炎、痔疮等症。近年,有关贝类多糖的研究证实其具有抗肿瘤、抗病毒、抗凝血、降血脂、降血糖等多种生物学活性[2],引起了学术界关注。贝类多糖的提取方法通常有水提法、碱提法和酶提法[3],但是各种方法提取的最佳条件尚有待探讨。本实验采用水提法提取,进行了醇沉浓度、浸提温度、浸提比及浸提时间四因
4、素三水平的正交实验,以找出一种最佳的提取方案,为进一步研究贝类多糖活性奠定基础。 1器材 1.1原料中国圆田螺,当地采集。 1.2仪器和试剂无水乙醇(蚌埠化学试剂厂,AR),丙酮(江苏省宜兴市展望化工试剂厂,AR),高速组织捣碎机(上海标本模型厂),高速离心机,恒温磁力搅拌器(国华电器有限公司),DZF6030A真空干燥箱(上海一恒科技有限公司),721分光光度计。 2方法与结果 2.1影响淡水贝类多糖提取主要因素的选择根据 表1淡水贝类多糖提取的因素水平(略) 2.3淡水贝类粗多糖含量测定以葡萄糖为标准品,采用苯酚-硫酸法测定淡水贝类粗多糖的多糖含量[4]。 2.3.
5、1总糖含量标准曲线的绘制精密称取105℃下干燥至恒重的葡萄糖约60mg,置100ml量瓶中,加蒸馏水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得葡萄糖标准溶液。精密吸取葡萄糖标准溶液0.0、0.1,1.5,2.0,2.5,3.0ml分别置于50ml容量瓶中,加蒸馏水定容。精密移取上述溶液各2ml,然后分别加入5%苯酚1ml,摇匀后迅速加入浓硫酸7ml,5min后置沸水浴中加热30min,取出置冷水中冷却。用分光光度计在波长490nm处测定吸光度A。以A值对浓度C绘制标准曲线,进行线性回归,得标准曲线方程:A=0.0545+0.0242C,r=0.9995。 2.3.2精密度实验精密移取葡萄糖标准溶液
6、2ml,共5份,按标准曲线项下方法操作测得平均吸光度为0.2845,相对标准差(RSD)为2.62%,结果表明精密度符合要求。 2.3.3稳定性实验精密移取样品液,按标准曲线项下方法操作,每10min测1次吸光度,到1h后改为30min测1次,120min内测490nm处测定吸光度8次得出RSD为2.43%,结果表明测定值在120min内保持稳定。以下吸光度的测定均在120min内完成。 2.3.4供试液总糖含量测定精密量取淡水贝类粗多糖10mg置10ml容量瓶中加蒸馏水稀释至刻度得供试液。取供试液各2ml,按“总糖含量标准曲线”项下操作,测定A值并代入回归方程计算多糖含量。 2
7、.4实验结果及方差分析结果结果见表2~3。 表2正交实验的设计与结果(略) 表3正交实验方差分析(略) 由表2直观分析影响淡水贝类多糖提取因素的主次顺序为A>B>C>D;从表3的方差分析可见A因素各水平之间有极显著性差异,B因素各水平之间有显著性差异,C因素对多糖含量也有一定影响。综合考虑最佳工艺为A2B2C1D1,即醇沉浓度75%,浸提温度60℃,浸提比1∶2,浸提时间6h。 2.5优选工艺的验证实验按优选的工艺进行验证实验,测得粗品
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