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《不同部位及生长年限云南红豆杉中紫杉醇含量的测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、不同部位及生长年限云南红豆杉中紫杉醇含量的测定【摘要】：目的研究云南红豆杉不同部位中紫杉醇的含量以及不同生长年限对云南红豆杉枝叶中紫杉醇含量的影响。方法采用HPLC法,HypersilODS2色谱柱,流动相为甲醇-乙腈-水(20∶30∶50),柱温30℃,检测波长227nm,比较云南红豆杉的树皮、针叶、小枝和树根中紫杉醇的含量,以及不同生长年限对云南红豆杉枝叶中紫杉醇含量的影响。结果云南红豆杉树皮中紫杉醇的含量最高,根中最少,小枝、针叶中含量较高；随着生长年限的增加,云南红豆杉枝叶中紫杉醇的含量逐渐增加。结论云南红豆杉枝叶的采摘以5年生以上为佳。【关键词】云南红豆杉 紫杉
2、醇 高效液相色谱法 Abstract：ObjectiveTostudythecontentoftaxolindifferentpartsofTaxusYunnanensisandtheeffectsofdifferentgroeontaxolcontent.MethodAHPLCmethodinationoftaxolcontentinbark,needle,tTaxusYunnanensi,andtheeffectsofdifferentgroe.ResultsTaxolcontentinbarkeinneedleandtneedleandtorethanfiveyea
3、rsgroe. KeyL)；固相萃取装置(美国JTBaker公司)。 1.2药物 药材均采自云南大理云龙县,经南方医科大学生药室鉴定为云南红豆杉(TaxusyunnanensisChengetL.K.Fu)的树皮、根、枝叶。 1.3试剂 紫杉醇(批号100382-200203),中国药品生物制品检定所提供；甲醇、乙腈为色谱纯,水为高纯水；其余试剂均为分析纯。 2方法及结果 2.1色谱条件 色谱柱：HypersilODS(4.6mm×150mm,5μm)；流动相：甲醇-乙腈-水(20∶30∶50)；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；检测波长：227nm；进
4、样量：10μL。 2.2对照品溶液的制备 精密称取紫杉醇对照品适量,加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液,作为对照品贮备液。 2.3线性关系考察 精密量取以上对照品储备液,加甲醇配成浓度为0.004、0.01、0.03、0.05、0.08、0.12、0.3mg/mL的对照品溶液。吸取上述对照品溶液各10μL,分别注入液相色谱仪,按上述色谱条件进行分离,测得峰面积。将峰面积对进样量进行回归,得紫杉醇的回归曲线为：Y＝2252.517X＋52.423(r＝0.9998),表明在0.04～3.0μg之间呈线性关系。 2.4供试品溶液的制备 供试样品自然干燥,粉碎成细粉
5、,过60目筛,40℃减压干燥。称取药材细粉约2～4g,精密称定,置具塞三角瓶中,加入乙酸乙酯-丙酮(1∶1)30mL,25℃超声提取40min,滤过,残渣再同法超声提取1次。合并上清液,减压蒸干,残渣加入石油醚(20mL×3次),超声洗涤3次,离心分离。弃去石油醚液,残渣挥干石油醚,加入氯仿(20mL×4次),超声振荡,离心分离。上清液合并,减压浓缩至干,作为待用样品。取固相萃取小柱,依次加入甲醇12mL,抽干,0.01mol/L的乙酸铵缓冲溶液12mL,抽干。将样品溶于少量80%的乙酸铵甲醇溶液中,上柱,抽干,依次用0.01mol/L的乙酸铵12mL、50%的乙酸铵甲醇
6、溶液12mL淋洗,抽干,再加入80%的乙酸铵甲醇溶液12mL洗脱,收集洗脱液,减压蒸发,残渣用甲醇溶解,定容至1mL,甲醇液经0.45μm微孔滤膜滤过,作为供试品溶液。对照品和供试品图谱见图1。 2.5精密度试验 取紫杉醇对照品溶液(0.0504mg/mL),重复进样5次,测得峰面积分别为1381.7362、1379.4353、1375.7966、1384.4672、1360.4456,RSD＝0.69%,表明仪器精密度良好。 2.6稳定性试验 取5年生枝叶供试品溶液,每隔2h进样测定1次,共5次,测得其含量分别为0.0628‰、0.0632‰、0.0637‰、0.
7、0642‰、0.0634‰,RSD＝0.83%,表明样品溶液在8h内测定稳定。 2.7重复性试验 取5年生枝叶5份,按“2.4”项下方法分别提取,精制,测定,含量分别为0.0634‰、0.0641‰、0.0639‰、0.0626‰、0.0613‰,RSD＝1.81%。 2.8加样回收率试验 精密称取5年生枝叶1g,置于100mL锥形瓶中,分别加入浓度为0.012mg/mL的紫杉醇对照品溶液5mL,按“2.4”项下方法制备供试品溶液,得5份供试品,分别对每份供试品按前述色谱条件进行测定。结果见表1。表1紫杉醇加样回收率试
