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1、慢性哮喘豚鼠及其在低氧干预下海马脑区超微结构的变化-->提 要:目的 探讨慢性哮喘动物模型海马超微结构变化及其在低氧干预后的改变。方法 复制慢性哮喘动物模型,分为低压低氧(低压舱)治疗组、常压低氧吸入治疗组及不治组,并设正常对照组,电镜观察海马超微结构变化。结果 电镜下慢性哮喘豚鼠海马神经元粗面内质网扩张,线粒体脊断裂、模糊,突触小泡减少、突触后膜稍肿胀;星状、小胶质细胞增生、胞浆肿胀、空泡形成;血管周围间隙增宽、基底膜肿胀、模糊、管腔狭窄。低氧干预后海马神经元核仁明显,细胞器丰富,粗面内网轻度扩张,突触小泡较丰富,突触后膜较致密,突触间隙略显增宽,胶质细胞及血管未见明显病变。结
2、论 反复发作的慢性哮喘可因缺氧致海马超微结构发生变化,经低压低氧及常压低氧治疗后因哮喘所致的海马超微结构损伤明显好转。 支气管哮喘是一种由嗜酸性粒细胞(EOS)及淋巴细胞等炎症细胞介导的迟发性变态反应所引起的气道高反应性疾病,严重影响儿童的身心健康。数十年来国内外众多学者对哮喘的发病机制和治疗进行了大量的研究,但少有对脑超微结构影响的报道。我们建立动物哮喘模型,并采用低压低氧及常压低氧吸入进行干预,观察了哮喘动物模型脑海马超微结构的变化。1 材料与方法1•1 实验动物及分组 采用本校实验动物中心提供的青年豚鼠16只,雌雄各半,体重(200±25)g,随机分为正常对
3、照组(NCG)、哮喘组(AG)、低压低氧治疗组(HHTG)和低氧吸入治疗组(HITG),每组4只。雌雄分笼,喂以小颗粒饲料和青菜胡萝卜,每天自由饮水。动物房清洁干燥、通风,定期紫外线消毒空气(1次/周),室温控制在22~25℃,湿度40%~50%,隔日更换、清扫巢穴1次。1•2 动物模型复制 AG、HHTG、HITG3组豚鼠采用卵蛋白致敏并诱发哮喘,即第1天用10%卵蛋白(OA)1ml腹腔注射致敏,第15天将致敏的豚鼠放入半封闭的有机玻璃箱内,用1%OA超声雾化吸入诱发哮喘,以出现烦躁、打喷嚏、咳嗽、呼吸急促、腹肌强烈收缩等典型哮喘样发作为标准,隔日1次,共5次,每
4、次30min。第1次诱发前45~60min给予苯海拉明10mg/kg耳后皮下注射,以预防豚鼠哮喘发作时突然窒息死亡。NCG用生理盐水代替OA同法处理。1•3 治疗干预1•3•1 低压低氧治疗 在5次诱喘成功后次日,将HHTG豚鼠放入动物低压舱(第三军医大学高原研究室提供)内,通过抽吸舱内空气逐渐减压,15min内达相当于海拔4000m高度,并保持90min后在15min内缓慢恢复到常压状态,结束1次治疗,共2h。每日1次,共10次。1•3•2 常压低氧吸入治疗 在5次诱喘成功后次日,将HITG豚鼠放在有机玻璃箱内盖上
5、涂有凡士林的箱盖以防漏气,从进气孔通入含(13±0•5)%氧气的O2/N2混合气体,流量2L/min,并保持出气孔通畅,每日2次,第1次持续5min,以后每次增加本论文由.51lunin,共10d。常规喂养至处死前。1•3•3 AG和NCG豚鼠分别经卵蛋白致敏诱喘成功后和生理盐水处理后,不作任何处理,喂养10d。1•4 检测指标和方法 各组豚鼠均于诱喘成功后第12天上午10时前处死,留取标本进行如下检测。1•4•1 光镜观察 每组取2只豚鼠经股动脉放血后立即开胸取出肺组织放入10%的福尔马林溶液中固定,常
6、规石蜡包埋、切片、HE染色,用于光镜观察。1•4•2 电镜观察 每组取2只豚鼠经股动脉放血后立即开胸经左心室升主动脉灌注生理盐水,同时剪破右心耳,冲净血液后再灌注4%多聚甲醛磷酸缓冲液300~400ml内固定,置4℃冰箱2h后断头取脑,分离出海马切成1mm×1mm×0•5mm小块,经2•5%磷酸缓冲的戊二醛溶液固定5h,浸入20%蔗糖硫酸缓冲液中4℃冰箱过夜,1%锇酸后固定2h,常规丙酮梯度脱水,环氧树脂包埋,制成1μm半薄切片,美蓝染色,定位,用LKV-B切片机切成50nm超薄切片,醋酸铀和柠檬酸铅双染后,在TEM-2000EX
7、型透射电镜60kV下观察。2 结果2•1 肺组织病理学变化 光镜下NCG豚鼠气道粘膜上皮完整,粘膜及粘膜下未见EOS浸润。AG豚鼠气道粘膜上皮细胞坏死脱落,管腔内有时可见脱落的上皮细胞和EOS,粘膜及粘膜下可见EOS聚集。HHTG和HITG豚鼠气道上皮部分修复,粘膜及粘膜下少见或偶见EOS浸润。2•2 脑海马超微结构变化 电镜下NCG豚鼠海马突触体前后膜清晰,突触小泡丰富,血管基底膜完整,血管内皮细胞结构正常,胶质突起无肿胀,与基底膜接触良好。髓鞘结构
