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《雷米芬太尼对失血性休克大鼠肺内凋亡因子表达影响的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、雷米芬太尼对失血性休克大鼠肺内凋亡因子表达影响的实验研究-->摘 要 目的 探讨雷米芬太尼对失血性休克大鼠肺损伤及肺内凋亡因子C-Jun、Bax、Bcl-2表达的影响。方法 健康SD大鼠72只,制作失血性休克模型,然后随机分为假复苏组(Ⅰ组)、乳酸钠林格液复苏组(Ⅱ组)和复苏+雷米芬太尼组(Ⅲ组)。观察失血及复苏后4h全过程血流动力学改变。在休克前、失血休克、复苏2h、复苏4h4个时间点,活杀动物取肺组织用于光镜和免疫组织化学检测,计算C-Jun、Bax、Bcl-2的阳性率。结果 成功地复制急性肺损伤模型
2、。各组不同时间点肺脏细胞内均有Bax和Bcl-2表达。Ⅰ组二者的表达始终处于一种低水平状态。Ⅱ组Bcl-2表达在休克建立时略有升高,之后一直保持较低水平,而Bax的表达从休克开始就显著高于休克前(P 在失血性休克肺损伤中不仅有多种细胞因子参与的免疫反应,而且还存在着凋亡基因表达的失衡。关于麻醉性镇痛药免疫调节作用的研究已多有报道,但是对肺内凋亡的影响目前尚少有报道。本研究在大鼠失血性休克肺损伤模型上观察了肺内早期凋亡蛋白C-Jun和Bcl-2家族表达的变化,以探讨雷米芬太尼对肺内细胞凋亡的影响。1 材料
3、与方法1.1 动物模型与分组 选用无特殊病原菌的健康SD大鼠72只,雌雄不拘,体重250~300g。麻醉后行气管内插管,股动脉、尾静脉插管。呼吸机机械通气,VT=6~8ml/kg,RR=60/min,平均气道压≤15cmH2O。快速放血使平均动脉压降至40mmHg,维持120min,之后进行复苏与分组。平均动脉压恢复至70mmHg为复苏成功。将动物随机分为假复苏组(Ⅰ组,调整输液速度,维持MAP在40±5mmHg)、乳酸钠林格液复苏组(Ⅱ组)和复苏+雷米芬太尼组(Ⅲ组)。每组动物分别于休克前、休克、复苏2
4、h、复苏4h活杀,每组各时间点的动物数为6只。用药组在复苏开始时输注雷米芬太尼0•5μg/(kg•min),靶血浆浓度为7•2μg/ml。1.2 观察指标及方法 ①连续观察动物的平均动脉压及输液量。②取各时间点肺组织制成石蜡切片,行HE染色,光镜下观察肺组织形态学的变化。③肺组织内凋亡蛋白C-Jun、Bax、Bcl-2的表达:取各时间点的肺组织石蜡切片(5μm)进行免疫组织化学染色分析。C-Jun成套试剂盒由武汉博士德公司提供,Bax和Bcl-2的相应抗体及试剂由北京中
5、山生物制品公司提供。DAB显色,苏木素复染。采用双盲法进行阳性率分析。图像扫描分析仪由我院基础实验室提供,所用软件为ImagePro-Plus图像分析系统。方法是每张切片随机取10个40×视野,计算每个视野阳性面积/(阳性面积+阴性面积),取均值。计算Bax/Bcl-2比值。1.3 统计学处理 数据结果以x±s表示,应用SAS软件进行多因素方差分析。2 结 果动物的体重、失血量、液体复苏组与用药组达到复苏成功所需要的液体量组间差异无统计学意义。大鼠肺组织HE切片表明成功复制了肺损伤模型,肺间质和肺泡内可见
6、中性粒细胞浸润,肺出血、水肿,肺泡壁增厚,代偿性肺气肿。在乳酸钠林格液复苏组,于复苏后4h可以观察到肺内单核细胞浸润;在高倍视野下可以看到肺内细胞固缩等凋亡现象。Bax和Bcl-2免疫组化显示,各组不同时间点肺脏细胞均有Bax和Bcl-2表达,Bax和Bcl-2蛋白分布于细胞胞体,染色为棕黄色。乳酸钠林格液复苏组Bcl-2表达在休克时阳性率略有升高,之后一直保持较低水平,而Bax的表达从休克开始就显著增高,之后继续升高。假复苏组Bax和Bcl-2的表达始终处于一种低水平状态。复苏+雷米芬太尼组的结果介于其
7、他两组之间。C-Jun蛋白的表达位于胞核处,组间阳性率结果与Bax和Bcl-2相似,但是从时间顺序来看要早于Bax和Bcl-2的表达,休克即刻就有阳性细胞弥漫性分布。在乳酸钠林格液复苏组,Bax/Bcl-2比值在复苏2h后开始升高,而在其他两组则无此变化。3 讨 论Subrato等[1]研究表明,使用乳酸钠林格液进行休克复苏可引起即刻凋亡的发生。有比较了不同的复苏液体对凋亡发生的影响,结果也证实乳酸钠林格液比血浆、全血和血浆代用品造成的凋亡发生早且程度重[2]。体外肺凋亡实验系统主要是超氧损伤[3]和气道
8、内注入损伤模型[4]。使用cDNA技术发现,肺脏的18个凋亡基因中有13个表达,包括C-jun、bax和bcl-2等。在本研究中,动物进入休克状态就可观察到C-Jun阳性细胞的弥漫性分布;而Bax和Bcl-2的阳性表达晚于C-Jun蛋白,Bax/Bcl-2比值是逐渐升高的。乳酸钠林格液复苏组凋亡蛋白表达显著高于用药组和假复苏组。有研究证实复苏后细胞凋亡的发生受bax基因的调节,而且使用乳酸钠林格液可显著增加凋亡细胞的阳性率;有
