地域差异与蛋氨酸合成酶基因多态性分布的相关性

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1、地域差异与蛋氨酸合成酶基因多态性分布的相关性【关键词】蛋氨酸合成酶多态性地域差异AbstractObjectiveToparethedistributionfeatureofMethionineSynthasegenebeteninQingHaiProvinceinedbyPCR-RFLPassay.ResultsMsgenotypefrequency:A/A0.5760,A/G0.4160,G/G0.0080.ThegeypesfrequenciesofMethioniseSynthaseinnomalfeatureofQingHaithoseinotherarea

2、inChina.ConclusionTherehasgeographicalvariationintheMethioniseSynthasePolymorphisminChina.KeyorphismGeographicalvariation研究发现血清同型半胱氨酸(Hcy)为心血管、脑血管、周围血管系统疾病及先天性畸形的独立危险因素,在相关疾病的发生、发展过程中起着重要的作用。近年来有关Hcy与妊娠并发症的研究也取得了明显进展［1］。在妇产科领域,有关Hcy与胎儿先天畸形、习惯性流产、先兆子痫及子宫内膜癌等疾病的关系也是近几年的研究热点。其中,甲硫氨酸代谢相关酶或辅

3、助因子缺乏可致同型半胱氨酸在血中蓄积,而蛋氨酸合成酶(methionisesynthase,MS)是Hcy再甲基化途径中的重要酶。我国人口众多,民族各异,且背景复杂,蛋氨酸合成酶基因的分布可能存在不同。本文利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)对125例青海省正常女性蛋氨酸合成酶基因的多态性进行检测,结果报告如下。1资料与方法1.1研究对象2005年6月至2006年9月在青海省妇幼保健院正常分娩的正常女性125例,排除生殖器官畸形、先天性遗传性疾病及血凝异常者。平均年龄25.67岁。彼此之间无亲缘关系。1.2引物的设计及合成MSA2756G所

4、用引物参照文献［2］,正义链:5′CATGGAAGAATATGAAGATATTAGAC3′;反义链:5′GAACTAGAAGACAGAAATTCTCTA3′,由大连宝生工程公司合成。1.3研究方法1.3．1DNA提取:取外周血4ml,采用Qiagen公司DNA提取试剂盒,按照试剂盒说明书进行提取。1.3.2PCR扩增:PCR反应体系体积为25μl,10μlDNA,0.6μlTaq聚合酶,14.4μlMS反应体系混合液。PCR反应条件:94℃预变性5min,94℃45s,55℃45s,72℃60s,共35个循环。1.3.3RFLP分析1.3.3.1HaeⅢ内切酶消化产物

5、:取17μlPCR纯化产物,2μlBuffer,1μlHaeⅢ内切酶,37℃水浴1h。1.3.3.23%琼脂糖凝胶电泳分析酶切产物:取20μl酶切产物加入3%琼脂糖凝胶负极端的加样孔,以溴酚蓝为指示剂,溴化乙锭(EB)为染色剂,在90V电压下电泳30min左右,然后在紫外分析仪上观察结果。1.3.4将所得结果与文献报道的其他地区、种族人群MS基因分布特点进行比较［3，4］。1.4统计学分析方法计算出正常人群中MS等位基因的频率,然后进行Hardy-S基因各亚型频率采用Kruskl-Wallis检验，等位基因频率采用χ2检验。图1MSA2765A等位基因产物琼脂糖凝胶电

6、泳图［M为DNA分子量标准,1、3、6、8为A/A基因型(野生型),4、7为A/G基因型(突变杂合子),泳道2为G/G基因型(突变纯合子)］2.2青海省正常女性MS基因型及基因频率（见表1）。表1青海省正常女性MS基因及基因频率MS表型观察数预期数n%n基因频率(%)A/A7257.676.832A78.40A/G5241.642.336G21.60G/G10.85.832表1可显示,MS各表型（A/A和A/G）的观察数与预期数比较,不存在显著差异(χ2=1.129，P=0.288)，说明其表型分布符合Hardy-S的检测结果具有代表性。2.3青海省正常人MS型频率与

7、其他地区人群MS型频率的比较（见表2～3）表2青海省正常人MS基因型频率与其他地区人群MS型频率的比较表3青海省正常人MS基因频率与其他地区人群MS型频率的比较表2和表3可显示,青海省正常女性中MS基因型以A/A最多见,A/G次之。青海省与湖南省、广东省的基因型频率相比,有显著性差异(χ2=23.672，P<0.001)。青海省与广东的基因型频率相比,两者有显著性差异(χ2=21.776，P<0.001)；青海省与广东的基因频率相比两者有显著性差异(χ2=14.189，P<0.001)；青海省与湖南的基因频率相比,两者有显著性差异(