zfp580基因在高脂血症小鼠主动脉组织中的表达

《zfp580基因在高脂血症小鼠主动脉组织中的表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、ZFP580基因在高脂血症小鼠主动脉组织中的表达【关键词】ZFP580；高脂血症；逆转录PCR；基因表达　　【Abstract】ObjectiveToexploretheexpressionofZFP580inaortictissueofhyperlipidemiamouseandthecorrelationalipid.Methods40maleC57BL/6Jmicelydividedinto2groups：controlandhyperlipidemiagroups.ReversetranscriptasePCRRNAexpression

2、sofZFP580inaortictissue.ResultsZFP580iagroup.ConclusionsThedevelopmentofhyperlipidemiamightbecorrelatedia；RTPCR；Geneexpression　　近年来，心脑血管疾病发病率居高不下，已经成为威胁人类健康的第一杀手。而高脂血症又是这类疾病的首要危险因素。随着医学研究的深入，从分子水平探讨高脂血症的发病机制，进而寻找新的治疗方法成为当前研究的热点。ZNF580是本课题组以致动脉粥样硬化因素——低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞系ECV304

3、，采用差异显示逆转录——PCR技术分析，筛选人主动脉cDNA文库，得到的一个全长为1726bp的新基因〔1〕。ZFP580为其鼠源性同源基因，其功能可能与高脂血症及动脉粥样硬化的发生有关，但其在高脂血症动物模型各组织中的表达情况尚不明确〔2〕。本实验拟复制高脂血症小鼠模型，并研究ZFP580在小鼠主动脉组织中的表达，为进一步阐明该基因功能奠定实验基础。　　1材料与方法　　1.1动物与主要试剂　　近交系雄性8周龄C57BL/6小鼠40只(购自维通利华公司)。DNA聚合酶、反转录酶等购自大连宝生物公司，RNA提取试剂盒购自北京鼎国生物技术公司。　　

4、1.2引物设计与合成　　根据GenBank发表的ZFP580cDNA序列设计相应的引物。上游引物：5′ATTAGATCTATGCTGCTGCTGCCGCCGC3′；下游引物：5′TAACTCGAGTCAGTGCAGGCGCACGTGC3′，扩增的片段为273bp。内参照βactin（540bp）上游引物5′GTGGGGCGCCCCAGGCACCA3′；下游引物5′CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC3′。引物由北京鼎国生物技术公司合成。　　1.3分组及造模　　随机分为两组(20只／组)；正常对照组和高脂组。所有动物

5、适应性喂养1in×10min离心，取血清上样于全自动生化分析仪，检测总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白含量。　　1.4.2组织标本采集　　取血后动物死亡，迅速开胸，剪取小段主动脉组织投入预先装有Trizol的匀浆管中匀浆，按Trizol试剂盒说明书提取小鼠主动脉的总RNA。紫外分光光度计检测RNA纯度及定量。此过程中所用器械、耗材，试剂等均预先进行RNase抑制剂处理。　　1.4.3目的片段的RTPCR　　逆转录合成cDNA：按逆转录试剂盒说明操作，每20μl反应体系内含有4μl25mmol/LMgcl2，2μl10×逆转录缓冲液，2μl10m

6、mol/LdNTP混合物，0.5μlRNA酶抑制剂，1UAMV逆转录酶，0.5μgOligo(dT)引物，2.0μgRNA模板。以上试剂混合后于42℃反应60min，然后于99℃加热5min，灭活酶活性，立即置冰水浴10min。　　用上述逆转录cDNA为模板扩增ZFP580。每25μl反应体系内含14.5μl2×PCR缓冲液，2μl25mmol/LMgcl2，2μl10mmol/LdNTP混合物，0.5μl(2.5U)TaqDNA聚合酶,1μl25pmol/L引物，5μl逆转录产物。PCR反应条件如下：94℃3min;30×(94℃45s,59

7、℃45s,72℃1min);72℃10min。每批模板均同时进行βactinmRNA的扩增作为内参照。PCR产物行1.5%琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像分析仪照相分析。　　1.5统计学分析　　用SPSS11.0软件包进行统计分析，两组间比较采用t检验，各指标均用x±s表示。　　2.2小鼠主动脉总RNA的提取及RFPCR结果　　见图1，图2。提取的小鼠主动脉总RNA经甲醛变性1%琼脂糖凝胶电泳后可见，28S、18S和5S三条带清晰可见，电泳条带28S和18S的亮度比值约为2，证明所提取的总RNA完整无降解。对总RNA进行逆转录和半定量PCR扩增，P

8、CR产物进行琼脂糖凝胶电泳。对结果进行凝胶成像分析处理，高脂组小鼠主动脉组织βactin与ZFP580条带灰度比（0.69±0.11）明显低于对照组