zfp580基因在高脂血症小鼠主动脉组织中的表达

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1、ZFP580基因在高脂血症小鼠主动脉组织中的表达作者：罗玉玉徐健孙慧燕孟祥燕孔麟麟张文成张丽莙【摘要】　　目的探讨ZFP580基因在高脂血症小鼠主动脉组织中的表达情况。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组和高脂血症组。采用逆转录PCR方法，检测2组小鼠主动脉组织中ZFP580的表达。结果ZFP580在两组小鼠的主动脉组织中均有表达，而高脂血症组表达量明显低于对照组（P＜0.01）。结论血脂升高使ZFP580在C57BL/6小鼠主动脉组织中表达明显下调，表明ZFP580表达改变与高脂血症的发生存在一定关系。【关键词】ZFP580；高脂血症；逆转录PCR；基因表达　　【Abstrac

2、t】ObjectiveToexploretheexpressionofZFP580inaortictissueofhyperlipidemiamouseandthecorrelationwithlevelsofplasmalipid.Methods40maleC57BL/6Jmicewererandomlydividedinto2groups：controlandhyperlipidemiagroups.ReversetranscriptasePCRwasusedtodetectmRNAexpressionsofZFP580inaortictissue.ResultsZFP580wasexp

3、ressedinaortictissueofthe2groups.Itsexpressionwasdownregulatedobviouslyinthehyperlipidemia9group.ConclusionsThedevelopmentofhyperlipidemiamightbecorrelatedwiththevariationofZFP580expression.　　【Keywords】ZFP580；Hyperlipidemia；RTPCR；Geneexpression　　近年来，心脑血管疾病发病率居高不下，已经成为威胁人类健康的第一杀手。而高脂血症又是这类疾病的首要危险因素

4、。随着医学研究的深入，从分子水平探讨高脂血症的发病机制，进而寻找新的治疗方法成为当前研究的热点。ZNF580是本课题组以致动脉粥样硬化因素——低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞系ECV304，采用差异显示逆转录——PCR技术分析，筛选人主动脉cDNA文库，得到的一个全长为1726bp的新基因〔1〕。ZFP580为其鼠源性同源基因，其功能可能与高脂血症及动脉粥样硬化的发生有关，但其在高脂血症动物模型各组织中的表达情况尚不明确〔2〕。本实验拟复制高脂血症小鼠模型，并研究ZFP580在小鼠主动脉组织中的表达，为进一步阐明该基因功能奠定实验基础。　　1材料与方法　　1.1动物与主要试剂9　　近交系雄性

5、8周龄C57BL/6小鼠40只(购自维通利华公司)。DNA聚合酶、反转录酶等购自大连宝生物公司，RNA提取试剂盒购自北京鼎国生物技术公司。　　1.2引物设计与合成　　根据GenBank发表的ZFP580cDNA序列设计相应的引物。上游引物：5′ATTAGATCTATGCTGCTGCTGCCGCCGC3′；下游引物：5′TAACTCGAGTCAGTGCAGGCGCACGTGC3′，扩增的片段为273bp。内参照βactin（540bp）上游引物5′GTGGGGCGCCCCAGGCACCA3′；下游引物5′CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC3′。引物由北京鼎国生物

6、技术公司合成。　　1.3分组及造模　　随机分为两组(20只／组)；正常对照组和高脂组。所有动物适应性喂养1w后，正常对照组在整个过程中用普通饲料喂养；高脂组饲以“西方饮食”(普通饲料+21%脂肪+0.15%胆固醇)喂养6w，以饮食诱导形成高脂状态。　　1.4取材及指标检测9　　1.4.1血脂测定　　摘除眼球取血，2500r/min×10min离心，取血清上样于全自动生化分析仪，检测总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白含量。　　1.4.2组织标本采集　　取血后动物死亡，迅速开胸，剪取小段主动脉组织投入预先装有Trizol的匀浆管中匀浆，按Trizol试剂盒说明书提取小鼠主动脉的总RNA。紫外分光光

7、度计检测RNA纯度及定量。此过程中所用器械、耗材，试剂等均预先进行RNase抑制剂处理。　　1.4.3目的片段的RTPCR　　逆转录合成cDNA：按逆转录试剂盒说明操作，每20μl反应体系内含有4μl25mmol/LMgcl2，2μl10×逆转录缓冲液，2μl10mmol/LdNTP混合物，0.5μlRNA酶抑制剂，1UAMV逆转录酶，0.5μgOligo(dT)引物，2.0μgRNA模板。以上试剂混合后于