megalin基因片段（3189

《megalin基因片段（3189》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、Megalin基因片段（3189【关键词】肾炎　　【摘要】目的大鼠Heymann肾炎（HN）是人类膜性肾病的经典动物模型，其发病机制的研究推动了人们对膜性肾病的理解。Megalin是HN主要致病抗原，也是低密度脂蛋白受体家族成员，其胞外结构形成的4簇配体结合区域均可能存在抗原决定簇。本实验拟克隆其第2簇配体结合区域，并表达融合蛋白，为进一步研究其抗原决定簇的确切位置及其功能打下基础。方法采用RT-PCR获得大鼠肾目的片段Megalin基因3189-4169，再与原核表达质粒pTrcHisA结合构建重组质粒，然后将重组质粒转入TOP10细菌诱导表达融合蛋白，

2、最后用egalin基因3189-4169;测序报告还显示有3个突变，分别位于Megalin基因的3404、3647、3702，其中前两个突变都不影响融合蛋白的氨基酸序列，第3个突变则将赖氨酸变成谷氨酸，经分析对融合蛋白表达无明显影响。（2）构建的重组质粒用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后，得到预期的2个片段4.4kb和1kb，分别表示质粒pTrcHisA和Megalin基因3189-4169。（3）用IPTG诱导TOP10（含有重组质粒）融合蛋白表达后，经egalin基因3189-4169的pTrcHisA）；成功诱导了融合蛋白的表达，为进一步研究Megal

3、in基因抗原决定簇的确切位置及研究Megalin的功能提供了基础。　　【关键词】肾炎;基因;表位;融合蛋白　　【Abstract】ObjectiveRatHeymannnephritis（HN）isaclassicmodelofhumanmembranousnephropathy.Researchofitspathogenesishelpunderstandthehumanmembranousnephropathy.MegalinisthemajorantigenofHN,anditisalsoamemberoftheloily；itsextracellu

4、larregioncanbindmultipleligands,andthisextracellularregionformfourclustersofligand-bindingdomainscontainingpathogenicepitopes.Soinal6xHistags.Thisstudyedtoprovidethebasistopreciselylocatethepathogenicepitopeandhelpunderstanditsfunction.Methodsegalingene3189-4169）,thenconstructedth

5、erebinantplasmidbyinsertingthisfragmentintopTrcHisA.Aftertherebinantplasmidedtodetectthefusionprotein.ResultsRT-PCRshoidHⅠandEcoRⅠ,ents:onesizeidandobtainingthefusionprotein,ayprovidebasisforfurtherstudy.　　【Keyann肾炎（HN）的研究。因此，对Heymann肾炎的分子免疫病理机制的研究将有助于提高对膜性肾病的认识，从而改进治疗。　　现已明确Megal

6、in（也称gp330）是HN的主要致病抗原成分，在肾脏主要表达于近端小管的刷状缘和肾小球上皮细胞的胞被小凹中［1,2］。它是一个跨膜糖蛋白，属于低密度脂蛋白受体家族成员，胞外区形成4簇潜在的受体配体结合区域［3］；可与多种配体结合，包括受体相关蛋白（RAP）、血纤维蛋白溶酶原、细胞外基质成分、纤溶酶原激活因子和纤溶酶原激活因子抑制物Ⅰ型复合物、载脂蛋白E富集的β-VLDL、脂蛋白脂肪酶、乳铁转移蛋白以及钙离子、胰岛素等［4~7］。对Heymann肾炎中Megalin可能与RAP结合形成HN抗原复合物，再与循环中的抗体结合形成原位免疫复合物，导致肾小球的损伤

7、和继之的大量蛋白尿［4,8］。　　对Heymann肾炎抗原的研究认为Megalin和RAP上均存在抗原决定簇。RAP上的抗原决定簇定位在N末端的15个氨基酸（39-44氨基酸）［9,10］；国内研究认为RAPC末端的108个氨基酸多肽也可能存在Heymann肾炎病理性表型,而对Megalin的抗原位点的分析因其分子量大，目前尚不清楚。AkihikoSaito等研究发现4簇配体结合重复序列表达蛋白中，仅第2个配体结合区域表达的蛋白能被检测到；确定第2簇配体结合区域中的46个氨基酸（氨基酸1160-1205，也是第5个配体结合重复序列）包含主要的抗原决定簇［1

8、1］，第2簇配体结合区域包含的结合位点，可与RAP及其他配体结合，