不同海拔地区绵羊脑组织不同部位金属硫蛋白

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1、不同海拔地区绵羊脑组织不同部位金属硫蛋白第一部分文献综述1金属硫蛋白的简述金属硫蛋白(Metallothionein，MTs)是一类富含金属离子的非酶金属结合蛋白，它的分子量非常小而半胱氨酸的含量却比较多。金属硫蛋白普遍存在生物界，在微生物、真菌、植物以及动物中均有发现[1-11]。1957年Margoshes和vallee在无意识中从马的肾脏皮质层中提取出来了一种结合蛋白，而这种结合蛋白富含金属元素镉和锌[12]，这是第一次发现金属硫蛋白。在1960年的时候，Kagi和Vallee[13]为以前所发现的这一类的蛋白质取了正规的名字，这个名字就是现在我们都知道的

2、金属硫蛋白(Metallothioneins，MTs)。至今为止，MTs依旧是在自然界发现的唯一一个结合镉的天然生物大分子。此后又陆续在微生物，大多数植物以及脊椎动物中都发现有MTs的存在，而且这些金属硫蛋白所具有的基本一致的理化性质。在科技高速发展的上世纪80年代，分子生物学逐渐渗透到每个研究之中，对MTs的研究也是如此。通过对金属硫蛋白分子生物学的研究，人们越来越了解它。在人们的研究过程中发现，金属硫蛋白在兔子、老鼠、犬类、牛、羊以及猪体内均有表达，而在很多哺乳动物的生殖器官（如睾丸，子宫等）、各种脏器（如心脏、肝脏、胰脏、脾脏等）、消化器官（如胃、小肠等）

3、中均分离得到了金属硫蛋白。在现在的研究中均发现金属硫蛋白在动物的肝脏中含量最丰富。然后金属硫蛋白的身影也在很多植物中（如番茄、烟草、蓝藻等）被发现了[1-16]。..2金属硫蛋白-III的简介最初研究者们在对阿尔茨海默病的发生进行研究时，一般认为大家大脑中的神经营养因子水平大量有着一定的降低从而造成了大脑中神经元的损伤与退变[23]。研究者于是在患者的大脑中补充了一定量的神经营养因子，对患者进行相应的治疗，但在患者身上并没有出现什么显著的效果[24]。研究者们继续努力研究在八十年代末发现CurlyFiber广泛的存在于阿尔茨海默病患者的脑中，由于锥形细胞瘤产型出

4、芽从而使其一段经常出现鳞状尖端。通过这一发现提醒研究者们阿尔茨海默病中严重的神经元退变与丧失并不是缺少神经营养因子的原因，有可能是因为脑中某个因子过度产生从而引起的代偿性过度生长的结果，通过这一现象，研究者们认为阿尔茨海默病的患者脑中应该有着相对正常人较高的神经营养活性。Uchida等人[25]在1991中分离得到了这一物质在正常人的脑组织中，它们对这一物质起名为神经生长抑制因子（GIF）。这一物质就是人类在神经系统中首个被发现并且经过鉴定得出具有抑制功能的特异性神经元生长机制的蛋白质分子。研究者们通过更进一歩的研究分析发现这一物质具有结合金属离子的特性而且它的

5、氨基酸组成与MT-I/II相似度很高。1992年Palmiter等人在人和小鼠中克隆出了这一基因，他们通过比较分析发现这一基因与MT-I/II有着高度的同源性，于是Palmiter等人就又将其命名为MT-III[26]。MT-III是MTs家族中的一员，它的基因结构、氨基酸序列、金属结合性质等均和哺乳动物组织中所得到的其他的MTs相似。但是只有MT-III具有明确的生理学效应，而MTs家族中其余的三个亚基到目前为止都没有发现具有明确的生理学效应，这种功能上的差异很可能与MT-III独特的结构特点有关。第二部分实验材料与方法1试验材料1.1试验动物本研究随机选取海

6、拔3800m30-36月龄的藏羊6只（青海河南县）以及海拔3600m4-5月的高山细毛羊6只（张掖肃南县），海拔1600m30-36月龄的藏羊3只（甘肃临洮，饲养时间在2年以上）以及海拔1600m30-36月龄的兰州大尾羊4只（甘肃临洮），分别在额叶，颞叶，顶叶，枕叶，脑桥，延髓，小脑，中脑，松果体，垂体（高山细毛羊没有采集垂体）等脑组织部位取样。1.2试验主要试剂RNase-freeixExTaqII(TliRNaseHPlus)、TaqDNA聚合酶、PrimeScriptRTreagentKitin，再经80℃烘干。耐高温器械经200℃烘烤4h-6h。在羊只

7、屠宰后，立即用斧头，锤子，钢锯以及骨钳将颅骨打开取出脑髓，再用高温处理过的手术刀、剪刀和镊子采集所需不同部位的脑组织样，置于用0.1%DEPC浸泡消毒过的离心管中，迅速放入液氮中速冻。带回实验室后再转入-70℃超低温冰箱中保存，用于总RNA的提取。2.2绵羊总RNA提取方法采用Invitrogen一步法总RNA提取试剂TrizolReagent的方法提取总RNA。具体方法见附录二。2.3RNA检测（1）称取琼脂糖0.30g，量取提前配置好的1TBE电泳缓冲液30mL，将他们全都倒入100mL清洗干净的锥形瓶中。（2）将锥形瓶轻轻摇晃使其混合均匀，再将锥形瓶放入微

8、波炉，中高火加热3~5m