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时间:2018-10-28
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1、不同产地防风多糖含量比较【摘要】目的比较不同产地防风多糖的含量。方法利用苯酚-硫酸法测定防风多糖的含量。结果安国的防风多糖含量最高为2.53%,围场的防风多糖含量最低为1.57%。结论不同产地防风药材中多糖的含量不同,可能与产地、采摘时间有关,此可供防风的进一步开发利用参考。【关键词】防风;多糖;苯酚-硫酸显色法Abstract:ObjectiveToparepolysaccharidecontentofRadixSaposhnikoviaefromdifferentareas.MethodsThepolysaccharidecontentR
2、adixSaposhnikoviaeetry.ResultsThepolysaccharidecontentofRadixSaposhnikoviaeinAnguoaylieonitsrespectiveproducingareaandpickingtime,etry防风为伞形科植物防风Saposhnikoviadivaricata(Turcz.)Schischk.未抽花茎植株的干燥根,入药始见于我国第一部中药专着《神农本草经》,具有解表祛风、胜湿止痉的功能,主要分布在我国的东北,华北等地〔1,2〕。防风中主要的化学成分有挥发油、色原酮、香豆
3、素、有机酸、多糖等〔3〕。研究证明防风多糖具有明显的体内抗肿瘤作用〔4,5〕。本实验利用苯酚-硫酸法测定了不同产地药材防风多糖含量,为防风药材的开发应用提供基础数据。1仪器与药品1.1仪器756紫外可见光分光光度计(上海分析仪器总厂);真空干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司);MP1100B型电子天平(上海精科天平厂);分析天平(日本)。1.2药品无水葡萄糖(中国药品生物制品检定所);硫酸(天津化学试剂有限公司);苯酚(分析纯);无水乙醇(天津化学试剂有限公司);三蒸水(实验室自制);防风药材购自张家口、昌平、安国和围场,经本院中医系马淑兰教授
4、鉴定;防风对照药材购自中国药品生物制品检定所。2方法2.1防风多糖的提取精密称取不同产地已粉碎、真空干燥的防风药材450.0g,加入1000ml无水乙醇回流提取2h,以除去单糖及其它醇溶性成分,过滤,滤渣干燥,加入1000ml三蒸水回流提取2h,趁热过滤,滤渣再加入1000ml三蒸水回流提取2h,合并两次滤液,减压浓缩,12000r/min离心20min,上清四倍体积无水乙醇沉淀静置过夜,抽滤,沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、石油醚洗涤,真空干燥即得防风多糖。2.25.0%苯酚标准液的制备取苯酚100g,加铝片0.1g和碳酸氢钠0.05g,常压蒸
5、馏,收集180~182℃馏分称取该馏分5g,置100ml容量瓶中,加三蒸水稀释至刻度,摇匀后滤过至棕色试剂瓶中,得5%苯酚溶液,置4℃冰箱备用。2.3葡萄糖标准液的制备精密称取105℃真空干燥的葡萄糖标准品50mg,置50ml容量瓶中,加三蒸水定容至刻度,即得1.00mg/ml的葡萄糖标准液。2.4样品溶液的制备精密称取不同产地已粉碎、真空干燥的防风药材0.50g,加入100ml无水乙醇回流提取2h,过滤,滤渣干燥,加入100ml三蒸水回流提取2h,趁热过滤,滤渣再加入100ml三蒸水回流提取2h,合并两次滤液,减压浓缩,12000r/min
6、离心20min,上清四倍体积无水乙醇沉淀静置过夜,抽滤,沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、石油醚洗涤,真空干燥后在100ml量瓶中以蒸馏水定容,作为样品溶液。2.5标准曲线的绘制精确移取葡萄糖标准液10,15,20,25,30,35μl,分别加入990,985,980,975,970,965μl三蒸水,加入5%苯酚溶液500μl,迅速加入浓硫酸2.5ml,静置20min,以试剂空白为参比,在490nm波长下测D值,得回归方程:A=0.061C-0.000,r=0.997。2.6换算因素测定精密称取真空干燥至恒重的防风多糖10mg,置于250ml容量
7、瓶,用蒸馏水稀释至刻度,摇匀,作贮备液。精密吸取贮备液0.3ml按“2.5”项下的方法测定吸光度。另精取葡萄糖标准液0.3ml同法操作,求出防风多糖中的葡萄糖含量。按下式计算换算因素f结果。f=2.47(f=多糖含量/多糖溶液中的葡萄糖含量×稀释倍数)。2.7精密度实验取同一样品溶液,重复测定吸光度6次,RSD为1.06%。结果表明精密度良好。2.8重现性实验取同一批样品溶液6份,平行测定吸光度,RSD为1.43%,表明重现性良好。2.9稳定性实验取样品溶液,照样品测定方法操作,每隔1h测定吸光度值,连续8h,结果吸光度基本无变化,表明样品在
8、8h内稳定性良好。2.10加样回收率实验分别精密吸取对照品溶液10,15,20,25,30μl,各加入样品溶液10μl,按照样品测定方法测定吸光度,代入回归方程计算
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