ptpn22基因多态性与自身免疫甲状腺病的相关性

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1、PTPN22基因多态性与自身免疫甲状腺病的相关性【摘要】目的:检测PTPN22基因的单核苷酸多态性（SNP）及其与中国人自身免疫甲状腺病（AITD）的相关性,并研究CTLA4基因SNP与PTPN22SNP的相互关系。方法:采用PCRRFLP技术分析231例AITD患者,其中Graves’病（GD）149例,桥本甲状腺炎（HT）82例和131例健康对照者PTPN22基因+1858C>T及CTLA4基因49A>G位点的基因型。采用SASPPCR技术分析PTPN22基因启动子-1123G>C的基因型。结果:（1）PTPN22基因的+1858

2、C>T位点不存在多态性;（2）PTPN22基因-1123G>CSNP的等位基因和基因型分布频率在GD组与正常对照组间的差异有统计学意义（P值分别为0.040和0.013,OR值分别为1.44和2.33）;（3）CTLA4基因49A>G位点的等位基因和基因型分布频率在AITD组与正常组间有明显差异;（4）与携带PTPN22的G等位基因及CTLA4的AA基因型者相比,携带PTPN22CC基因型与CTLA4AG或GG基因型者发生GD的OR值=3.31（95%CI:2.69-8.89）。结论:PTPN22基因启动子-1123G>CSNP与

3、GD的发生相关,其CC基因型与CTLA4基因的G等位基因对GD的发生起协同作用。【关键词】蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22基因自身免疫性甲状腺病单核苷酸多态性　　自身免疫性甲状腺病（autoimmunethyroiddisease,AITD）是一组以甲状腺为靶器官的自身免疫性疾病,包括Graves病（Graves’disease,GD）、桥本甲状腺炎（Hashimoto’sthyroiditis,HT）及产后甲状腺炎等。遗传因素在AITD的发病中起重要作用,目前比较肯定的AITD易感基因有人类白细胞抗原基因（humanleucocyteantigen,HLA）和

4、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（cytoxicTlymphocytoassociatedantigen4,CTLA4）基因。蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22(PTPN22)基因编码淋巴特异性酪氨酸磷酸酶（Lyp）,Lyp是一种细胞内的酪氨酸磷酸酶,通过其富含脯氨酸的基序（称为P1）与Csk激酶（C末端Src酪氨酸激酶）的SH3结构域相结合,二者的作用使与T细胞受体（TCR）信号转导有关的激酶如Lck、Fyn和ZAP70去磷酸化,发挥抑制T细胞活化的作用［1］。多个大型、独立的研究重复了PTPN22基因620密码子的1858C/TSNP与1型糖尿病(T1D)

5、［2］、类风湿性关节炎（rheumatoidarthritis,RA）［3］、AITD［4］、系统性红斑狼疮（systemiclupuserythematosus,SLE）［5］等有相关性,然而对日本人群RA［6］、T1D［7］以及GD［8］的大样本相关性分析并未发现PTPN22的1858TSNP。为此,我们选择了与高加索人AITD的发生有相关性的外显子14+1858SNP以及与日本人T1D的发生相关的启动子-1123SNP为研究内容,观察中国北方汉族人群上述位点是否存在多态性以及与AITD的相关性,并分析CTLA4基因多态性与PTPN22的关系,探讨AIT

6、D的遗传背景。　　1材料和方法　　1.1材料病例组为在西安交通大学第一附属医院内分泌专科门诊收集的231例AITD患者,平均年龄（36.7±14.2）岁,其中GD149（男40,女109）例;HT82（男21,女61）例。GD和HT的诊断依据为典型的临床表现结合实验室检查。从我院查体中心按AITD患者的年龄分布、性别构成随机选取131例健康人为对照,其中男39例,女92例,年龄（34.5±13.3）岁。离心柱型血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒与PCR扩增试剂盒2TaqPCRMasterix均购自北京天为时代公司;限制性内切酶RsaI购自纽英伦生物技术有限

7、公司;BbvI购自宝生生物工程有限公司。引物由北京奥科生物技术有限责任公司合成。　　1.2方法　　1.2.1外周血基因组DNA的提取清晨空腹静脉血EDTA抗凝,采用离心柱型血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒提取外周血基因组DNA,按说明书操作。　　1.2.2PCR扩增反应（1）PCR扩增PTPN22基因外显子14:根据GenBank中的PTPN22基因序列自行设计引物,上游引物为:5′TGGGCTCAAGTGATCCTCTCA3′,下游引物为:5′ACTGATAATGTTGCTTCAACGGA3′。反应体系20μL,其中2×TaqPCRMaster

8、ix10μL,基因组DNA1μL,上下