inos、cd34在喉鳞状细胞癌组织中的表达与血管形成的关系

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1、iNOS、CD34在喉鳞状细胞癌组织中的表达与血管形成的关系：李正贤，刘庚勋，颜美荣，刘阳云【摘要】目的探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和CD34在喉鳞状细胞癌中的表达及其发病过程中的作用。方法采用免疫组化Elivision法检测30例喉鳞状细胞癌、10例声带非典型增生中iNOS和CD34的表达，并检测MVD。结果30例喉鳞状细胞癌中iNOS的阳性表达率为80．33％(25/30)，声带非典型增生中iNOS的阳性表达率为10%(1/10)。CD34在喉鳞状细胞癌和声带非典型增生的阳性表达率分别为80％(24/30)，30％(3/10)。iNOS、CD34阳性表达两组间差

2、异有统计学意义（P<0．025）。喉鳞状细胞癌和声带非典型增生中微血管密度(MVD)分别为43．45±10．06、21．34±6．31，两组间差异有显著统计学意义（P<0．001）。结论iNOS、CD34在喉鳞状细胞癌中的高表达，提示iNOS、CD34可促进血管形成，可能与喉鳞状细胞癌的发生、发展及侵袭转移有关。因此，选择性抑制iNOS和CD34可望成为基因治疗喉鳞状细胞癌的新思路。【关键词】诱导型一氧化氮合酶；CD34；喉鳞状细胞癌；血管形成；免疫组织化学Abstract：ObjectiveToinvestigatetheexpressionsofinduc

3、iblenitricoxidesynthase(iNOS)andCD34andtheirrolesintheoccurrence,developmentandmetastasisoflaryngealsquamouscellcarcinoma(LSCC).MethodsTheimmunohistochemicalElivisionmethodinetheexpressionsofiNOSandCD34in30casesofLSCCand10casesofvocalcordsatypicalhyperplasia(VCAH),andthemicrovasculardensi

4、ty(MVD)easuredasayplayimportantrolesintheincidence,developmentandmetastasisofLSCC.Keyouscellcarcinoma;angiogensis;immunohistochemistry近年来的研究发现，一氧化氮合酶(NOS)活性的增高与肿瘤血管生成有关[1～2]。喉鳞状细胞癌的发生发展及侵袭转移其发病机制目前仍不十分清楚，为探讨喉鳞状细胞癌的发生、发展和转移与新生血管化的关系，本研究通过检测喉鳞状细胞癌中iNOS和CD34的表达水平和检测微血管密度，探讨诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和CD

5、34在喉鳞状细胞癌侵袭转移中的作用。1材料和方法1．1一般资料选取本院1995—2005年经病理证实的喉鳞状细胞癌30例手术标本。本组病例中男27例，女3例，平均年龄57．3岁，临床分型：声门上型3例，声门型25例，声门下型2例；临床分期按国际抗癌协会1997年修订的TNM分类及分期：T14例，T215例，T39例，T42例；N019例，N17例，N24例；Ⅰ期2例，Ⅱ期19例，Ⅲ期6例，Ⅳ期3例；组织学分级：高分化鳞癌18例，中分化鳞癌7例，低分化鳞癌5例。对照组为同期手术的10例声带非典型增生(vocalcordsatypicalhyperplasia，VCAH)，平

6、均年龄45．6岁。标本经10％甲醛固定，常规脱水、石蜡包埋。1．2方法标本经固定后，常规脱水石蜡包埋，作3μm连续切片，分别进行HE染色和免疫组织化学染色。切片脱蜡至水化，3％过氧化氢孵育10min，消除内源性过氧化物酶活性，蒸馏水冲洗，PBS浸泡3次×2min，微波炉抗原修复(95～98℃)，自然冷却至室温，加入1：100iNOS和1：150CD34单克隆抗体，37℃孵育30min，或4℃过夜，用普通小鼠IgG及PBS代替一抗作阴性及空白对照，PBS冲洗3×2min，滴加增强剂(A)，37℃孵育30min，PBS冲洗3次×2min，滴加生物素聚合物(B)，37℃孵育30

7、min，PBS冲洗3次×2min。二氨基联苯胺显色，苏木素复染，中性树胶封片，显微镜观察照相。1．3染色结果判断阳性细胞为呈棕黄色颗粒的阳性反应产物。每张切片在高倍显微镜下(200倍)随机选择5个视野，计算每个视野阳性细胞率，取平均值作为该标本的阳性细胞率。iNOS、CD34表达结果分为:(1)阴性(-)：无阳性细胞或有散在阳性细胞，阳性细胞率<10％。(2)阳性(+)：切片中阳性细胞率>10％。按VD。1．4统计学方法计数资料用率(％)表示，组间差异采用χ2、t检验；所有数据在SPSSl1．0统计软件上进行，以P