pparα信号通路基因与牦牛肌内脂肪酸含量相关分析

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1、PPARα信号通路基因与牦牛肌内脂肪酸含量相关分析第一部分文献综述1．1牦牛简介牦牛(Bosgrunniens)是适应海拔2500~6000m高寒地区环境的特有牛种，其主要分布在我国青藏高原及其毗邻地区。中国拥有牦牛1400多万头，约占全世界牦牛数量的92%以上，其主要分布在青海、西藏、四川、甘肃、新疆和云南等六个省的高寒草原区[1]。中国牦牛主要包括12个品种和1个人工培育品种，分别为分布在青海省的环湖牦牛、长毛型牦牛、青海高原牦牛；分布在西藏的帕里牦牛、西藏高山牦牛和斯布牦牛；分布在四川的九龙牦牛和麦洼牦牛；分布在甘肃的天祝白牦牛和甘南牦牛；分布在新疆

2、的巴州牦牛以及分布在云南的香格里拉牦牛；1个人工培育品种为大通牦牛[2,3]。牦牛具有适应能力强，耐寒冷，耐粗饲，抗病能力强等特点，从而能够在空气含氧量低，气候寒冷，牧草生长季短的高寒草地环境条件下生存并繁衍，为当地牧民提供肉、奶、皮、毛及役力等必需的生产和生活资料。牦牛肉以高蛋白质和低脂肪的特点而名列肉类前茅，是世界各地消费者非常喜欢的肉品之一。甘南牦牛肉蛋白质含量为21.43%，脂肪含量为3.13%，干物质含量为26.56%；Cu，Fe，Zn，K元素含量较高，其中Cu，Fe的含量分别为0.57mg/100g和2.34mg/100g，极显著高于黄牛；牦牛

3、肉中氨基酸总量(TAA)为88.20g/100g干样，必需氨基酸(EAA)含量为35.68g/100g干样，均高于黄牛肉中相应指标[4]。牦牛肉因其具有较高的蛋白含量和其它营养物质含量可以为低蛋白饮食群体，特别是为儿童和孕期妇女提供有价值的营养补充。牦牛肉中含有的共扼亚油酸（CLA），具有抗肿瘤、抗氧化、降低动物和人体胆固醇以及甘油三脂和低密度蛋白胆固醇、抗动脉粥样硬化、提高免疫力、提高骨骼密度、防治糖尿病等多种重要功能，对减肥和改善肌肉组织也有很好的作用。从食品营养科学的角度考虑，牦牛肉营养价值无可厚非，但是牦牛肉在嫩度等指标上比其它牛肉稍逊一筹[5]。

4、.1.2脂肪及其脂肪酸目前评价肉品质的主要指标有肉色、pH值、系水力、肌内脂肪含量、嫩度和口感风味等。肌肉内脂肪均匀地分布于肌肉组织，并且富含磷脂，约占整个组织脂肪的20％-50％，而磷脂是影响肉品挥发性风味成分的重要前体物，因此，肌内脂肪与肉品风味有很大的关系。同时，当肌束间积聚脂肪，结缔组织失去弹性，肌束容易分离，可以使肌肉变得容易咀嚼。脂肪的主要成份为甘油三酯(Triglyceride)，是由1个甘油分子和3个长链的脂肪酸分子组成的，其中甘油的分子比较简单，而脂肪酸的种类和长短却不相同，因此脂肪的性质和特点主要取决于脂肪酸，不同食物中的脂肪所含有的脂

5、肪酸种类和含量不一样，因此可形成多种甘油三酯。自然界有40多种脂肪酸，脂肪酸一般由4个到24个碳原子组成，其中16个、18个和20个碳原子的链最为常见。脂肪酸在有充足氧供给的情况下，可氧化分解为CO2和H2O，并释放大量能量，是机体主要能量之一。肌内脂肪酸是一个影响嫩度、多汁性、剪切力、适口性及pH值等肉质性状的重要因素[6,7]，适当提高肌内脂肪酸的含量、优化肌内脂肪酸结构，可提高肉产品的适口性[8]。与一些从国外引进的体形大、生长快的畜禽品种相比，国内一些地方品种的肉产品口感较好，深受消费者青睐，其重要原因之一就是肌内脂肪酸的含量较高，且分布均匀[9]

6、。因此肌内脂肪酸是影响动物肉品质的重要因素之一，已经成为近年来研究的重点。.第二部分材料与方法2.1试验动物的及组织样品的采集组织样采自甘南藏族自治州营养水平一致的健康成年牦牛和黄牛的12~13肋骨处背最长肌(各8头)。用于提取RNA的组织置于液氮中保存，用于测定肌内脂肪酸组成的肌肉组织在排酸24h后于4℃保存。.2.2背最长肌脂肪酸组成测定取背最长肌样品约10g，破碎后溶于60mL氯仿-甲醇(1:1)溶液，样品均化后浸提24h，取下层氯仿溶液，65℃水浴加热挥干后，加入2mL石油醚与苯的混合试剂(1:1)使之溶解，再加入5mL2mol/LKOH-CH3O

7、H(1:1)溶液，室温静置30min后，加入蒸馏水使全部石油醚甲酯溶液上升分层，取上清液进行GC-MS分析。气象色谱条件：程序升温至160℃，保持2min，以5℃/min的速度升温至220℃，保持1min，以8℃/min的速度升温至230℃，保持1min；进样口250℃，分流比60:1，载气为He气，流速为1.2mL/min；质谱条件：电离方式EI，离子源温度：250℃，电子能量：70eV，溶剂延迟：1.8min，电子倍增器：1105kV，全扫描方式，扫描范围：30~450aum，扫描速度：563/s。数据均以平均值加标准差(x±SD)表示，

8、并使用SPSS18.0统计软件进行方差分析。2.6候选基因的克隆2