糖类的提取分离与薄层层析分析

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1、糖类的提取分离与薄层层析分析实验简介：薄层层析（thinlayerchromatography，TLC）是在吸附剂或支持介质均匀涂布的薄层上进行的，是一种广泛应用于氨基酸、多肽、核苷酸、脂肪酸、脂肪类、糖类、磷脂和生物碱等多种物质的分离和鉴定的层析方法。本实验是从水果中提取单糖、双糖和多糖组分，釆用硅胶G薄层层析法分析糖类成分。一、实验目的1、了解并初步掌握从水果中分离提取单糖、蔗糖及淀粉的原理。2、学习薄层层析的一般操作及定性鉴定的方法。二、实验原理1、单糖及多糖的提取凡不能水解为更小分子的糖即为单糖。单糖种类很多，其中以葡萄糖分

2、布最为广泛，存在于各种水果、谷类、蔬菜和动物血液中。由于单糖分子中冇多个羟棊，增加Y它的水溶性，尤其在热水屮溶解度很大；在乙醇屮也有很好溶解性，但不溶于乙醚、丙酮等有机溶剂中。而蔗糖等双糖分子也易溶于水和乙醇中。因此，单糖和双糖一般可用热水或乙醇将其提取出来。多糖是由多个单糖分子失水缩合而成的大分子化合物。在自然界中分子结构复杂而多种多样，冇不溶性的结构多糖如植物纤维素、半纤维素，动物的几丁质等；另有一些为贮存物质如淀粉、糖原等；还有一些多糖具有复杂的生理功能。多糖中的淀粉不溶于冷水及乙醇，但可溶于热水中形成胶体溶液。因此可以用乙醇

3、提取单糖及低聚糖，然后提取淀粉等多糖。2、薄层层析薄层层析的主要原理是根据各组分在溶剂中的溶解度不同和吸附剂对样品各组分的吸附能力的差异，最终将混合物分离成一系列的斑点。糖的分离鉴定可用吸附层析或分配层析，吸附层析常用的吸附剂为硅胶，分配层析常用的支持剂是硅藻土。在吸附剂或支持剂中添加适宜的黏合剂后再涂布于支持板上，可使薄层粘牢在玻璃板（或涤沦片基）这类基底上。硅胶G是一种已添加了黏合剂一石膏（CaSO4）的硅胶粉，糖在硅胶G薄层上的移动速度与糖的相对分子质量和羟基数等有关，经适当的溶剂展开后，糖在硅胶G薄板上的移动距离为戊糖〉己糖

4、〉双糖〉三糖。若采用硼酸溶液代替水调制硅胶G制成的薄板可提高糖的分离效果。薄层层析的展层方式有上行、下行和近水平等。一般常采用上行法，即在具冇密闭盖子的玻璃缸（即层析缸）中进行，将适量的展层溶剂倒于缸底，把点冇样品的薄层板放入缸屮即可（如图1所示）。保证层析缸内有充分展层溶剂的饱和蒸汽是实验成功的关键。图1密闭式展层缸1.缸盖2.层析缸3.薄层板4.点样处5.展层溶剂三、实验用品1、实验材料：新鲜葡萄或苹果。2、实验试剂(1)标准糖溶液：取果糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖，分别用75%乙醇配制成10mg/mL溶液。(2)标准糖混合溶剂：取

5、上述各种糖，混合后用75%乙醇配制成10mg/mL溶液。(3)0.1mol/L硼酸(H3BO3)溶液。(4)展层溶剂：①乙酸乙酯:乙酸:水=2:1：1；②氯仿:甲醇=60:40(V八0。(5)苯胺-二苯胺显色剂：lg二苯胺，ImL苯胺和85%5mL磷酸溶于50mL丙酮。(6)lmol/LH2SO4(7)1%碘-碘么钾(I-KI)溶液：将碘化钾20g及碘10g溶于100mL蒸馏水中，使用前需稀释10倍。(8)BaCO33、实验器材电吹风，层析缸(带密封盖)，烘箱，硅胶G,毛细管(O0.5mm),喷雾器，干燥器，玻璃板(5x10cm)，

6、玻璃棒，烧杯，直尺，铅笔。UI1、糖类的提取：(1)还原糖及蔗糖的提取称取25g新鲜葡萄(去核)或苹果，将其磨碎后转入250mL三角烧瓶中，加入80%乙醇50mL，放在50°C水浴中抽提30min。5000r/min离心10min,收集上清液，沉淀用85%乙醇适量再提取1〜2次(视样品不同而定反复抽提的次数)。收集合并所有上淸液，沉淀部分烘干留待提取测定淀粉等多糖用。(2)淀粉的水解取乙醇提取后的沉淀物0.5g,放入三角烧瓶中，加20mLlmol/LH2SO4,盖上表面皿，在沸水浴锅中加热水解，并经常摇动，1.5〜2h后，取一滴水解

7、液放在白瓷板上，加1滴1%I-KI溶液，检査淀粉是否水解完全，如为紫蓝色，则说明水解不完全，再继续水解0.5h，直至水解液对I-KI不显色为止。样品冷却后，小心将三角烧瓶中的水解液转移至lOOmL烧杯中，并用蒸馏水冲洗三角烧瓶3次，加BaCO3中和至中性，过滤或离心，上清液水浴蒸发浓缩后用于TLC分析。2、硅胶G薄层层析分析(1)硅胶G薄层板的制备：将制备薄层用的玻璃板预先用洗液洗干净并烘干,玻璃板要求表面光滑。称取硅胶G粉6g,加入12mLO.lmol/L硼酸溶液，用玻棒在烧杯中慢慢搅拌至硅胶浆液分散均匀、黏稠度适中，然后倾倒在干

8、净、干燥的玻璃板上，倾斜玻璃板或用玻棒将硅胶G由一端向另一端推动，使硅胶G铺成厚薄均匀的薄层。待薄板表面水分干燥后置于烘箱内，待温度升至110QC后活化30mino冷却至室温后取出，置于干燥器中备用(注意：避免薄板骤热、骤冷使薄层断裂