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1、基于医学的方法心气虚证动物模板-->第一章实验相关因素的控制动物实验的标准化是提高研究结果的准确性、重复性、可比性的前提条件,而实验过程关键因素的规范化控制又是整个实验成功的首要保证。根据《素问.举痛论》“劳则喘息汗出,外内皆越,故气耗矣”。《灵枢。五味篇》“谷不入半日则气衰,一日则气少矣”理论,我们采用力竭运动(负重游泳、强迫跑步)、控食以及大剂量心得安等复合因素造模法建立多品系大、小鼠的心气虚证模型。因此,每日饲料量控制在多少比较合适?强迫负重游泳与跑步的力竭标准是什么?心得安给多大的剂量才会既对心功能产生明显的抑制作用又无毒性反应?什么时候是灌服心得安的最佳时机
2、?这些问题均是造模成功与否的关键所在。为了较好地解决以上问题,我们做了以下实验:第一节大鼠饲料量的质控首先应使大鼠能符合气虚证,根据“饥则损气”的原理,我们采用了控食的方法,以探寻最佳的控食量。一、材料与方法(一)实验动物及饲料健康大鼠,体重250士159,由浙江中医学院实验动物中心提供。普通大鼠饲料,由苏州双狮实验动物饲料有限公司生产。(二)动物分组32只SD大鼠,随机分为4组,每组8只,雌雄各半,单笼饲养。具体安排如下:控食组根据不同的饲料量分为3组(每组每日喂大鼠饲料分别为39八。09体重、49/1009体重、59/1009体重),正常组则不限制饲料量。各组均自
3、由饮水。(三)实脸方法按照以上分组法进行控食实验,连续称体重4天,并观察大便情况。第二节力竭试验的质控一、强迫负重游泳力竭试验质控(一)实脸方法将SD、edLab生物信息采集处理系统(南京美易生物科技有限公司):SN一682放射免疫Y计数器(中科院上海原子核研究所日环仪器厂);玻璃游泳缸(高45em,直径22em);TEAI一10透射电镜(荷兰菲利浦公司)。4.实脸试荆盒放射免疫试剂盒(中国原子能科学研究院同位素研究所);放射免疫试剂盒(中国原子能科学研究院);血浆心钠素(ANP)放射免疫试剂盒(中国原子能科学研究院);试剂盒(ABECKMANCOULTERPANY,
4、FRANCE);MDA试剂盒(南京建成生物工程研究所):5OD试剂盒(南京建成生物工程研究所);血清心肌肌钙蛋白I检侧试剂盒(江苏省人民医院心血管疾病研究所)。第一章实验相关因素的控制…………3第一节大鼠饲料量的质控…………3第二节力竭试验的质控…………4一、强迫负重游泳力竭试验质控………4二、强迫跑步力竭试验的质控…………6第三节心得安实验的质控…………7一、材料与方法…………8二、实验结果…………9第四节讨论…………11第二章实验部分…………15结论本实验是在持续力竭试验形成气虚的基础上加用心得安,以促使心肌收缩力进一步下降,心气虚证显现。因此使用心得安的时间应在
5、虚证出现后最为理想,从力竭实验的结果来看,游泳法中(图2一2)SD、大鼠在17天后耐力时间呈持续下降趋势,因此我们选在第17天开始给大鼠灌服心得安。WKY大鼠的游泳曲线波动较大,从第12天开始呈现持续下降趋势,至第14天耐力时间与第3天比较已显著降低。故而我们选择第14天开始灌服心得安,以利于造模成功。跑步法(图2一4)中SD的跑步耐力时间从第14天开始呈现下降趋势,并持续至第18天。我们选择第17天开始给大鼠灌服心得安,这样有利于造模成功。粗star大鼠的跑步耐力时间在一周时开始呈现下降的趋势,此时动物的整体情况也逐渐衰退,体毛蓬松,缺乏光泽,口唇及尾部皮色变淡,有
6、缩肩拱背现象。第15天时的跑步耐力时间短于第1天的跑步耐力时间,据此,我们认为虚象已显,故选择在第15天开始灌服心得安,以促使造模成功。-->3中国中西医结合学会心血管学会1990年1o月修订,冠心病中医辫证标准.中国中西医结合杂志1991,11(5):2574.屈松柏,张晓星,张道亮.心脏病人心阴虚心气虚证候特征探讨.湖北中医杂志,1995,17(3):24-265丘瑞香,罗致强,朱雅宜.左右寸脉与心肺病证相关性探讨.广州中医学院学报,1995,12(l):7-106潘毅,杨页君.心系疾病心气虚证的心功能指标判别诊断.山东中医杂志,1997,16(4):151-15
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