pten基因突变及其表达与胃癌的临床病理学研究

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1、PTEN基因突变及其表达与胃印戒细胞癌的临床病理学研究前言（Introduction）胃癌（GastricCancer）是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，据2000年资料统计， 全球每年新发胃癌87万例，占所有新发癌症病例的9％，居第4位。WHO2005年约有100万人因胃癌死亡，居癌症死因的第2位。其发病及死亡率占消化道恶性肿瘤的第一位[1]。自从PTEN(phosphataseandtensinhomologueonchromosome10)于1997年最初被证 明为一个候补肿瘤抑制基因以来[4]，已有超过2500篇关于

2、PTEN的文献发表[5]，PTEN 已证明它是一个值得注意的分子。该基因定位于染色体10q23.3，PTEN在普遍存在具 有转导信号调节生长、增殖和生存功能的PI3-K途径中作为一个关键负调节子。PTEN基因的突变和部分或全部丢失已经在各种组织来源的肿瘤中被频繁报道。除此之外，在以发育缺陷和高度肿瘤易感性为特征的三个有联系的人常染色体显性遗传疾病中也发现PTEN基因突变[6]。PTEN与p53功能相似，可能具有作为维护基因组稳定的监护人的功能[7]。该基因自发现起就受到众多研究者的关注，其结构、功能异常广泛存在于人类多种恶性

3、肿瘤中，已成为近年肿瘤学研究的热点[8]。研究发现，PTEN在胃癌、前列腺癌和乳腺癌等多种恶性肿瘤中表达下调，而PTEN 基因的突变、杂合性缺失和过甲基化等遗传学改变，构成PTEN表达下调的分子基础。 PTEN基因的突变和部分或全部丢失已经在各种组织来源的肿瘤中被频繁报道，而染色 体10q的丢失也在很多肿瘤组织中被频繁的报道。除此之外，在以发育缺陷和高度肿瘤 易感性为特征的三个有联系的人常染色体显性遗传疾病中也发现PTEN基因突变。在许 多不同类型的肿瘤组织、移植瘤和肿瘤细胞系中都发现有PTEN蛋白表达下降，缺失和 突变，各

4、类癌总突变率为5-40%.其间的差异可能来自于组织学类型及临床分期的不同。 PTEN基因在胃癌中有一定比率的突变发生，其功能丧失与胃癌发展有一定相关，尽管有关不同分型胃癌的形态发生和组织发生病机制尚不清楚，但随着分子生物及遗传学研究的不断深入，抑癌基因的失活或表达程度减低可能是其特殊生物学行为特征的分子基础之一。以免疫组化及PCR-SSCP基因测序综合研究胃癌中PTEN基因的突变和表达差异，从而评估PTEN基因在胃癌中发生中的作用，可能有助于获取新的关于胃癌分子遗传学信息进而对于不同分型胃癌的形态发生，发病机制以及改善胃癌的

5、分子诊断方面具有重要意义。近年来，国内大量关于PTEN蛋白表达的研究表明，从蛋白水平推测PTEN基因表达缺失或突变在胃癌的发生发展中起重要作用，与胃癌的临床分期、病理组织学分级、淋巴结转移等有密切关系。因此，PTEN基因及其蛋白表达的检测可作为临床诊断、恶性程度评估、治疗和判断预后等的分子标记。目前研究发现胃癌的发生发展是个多步骤、多基因、多因素综合作用的复杂过程，与抑癌基因的失活、原癌基因的激活、细胞间粘附等密切相关。近年来，随着肿瘤分子生物学的进展，对胃癌分子水平的认识逐步深入，人们在胃癌的发病机制和临床诊治方1PTEN

6、基因突变及其表达与胃印戒细胞癌的临床病理学研究面的研究取得了大量成果，但国内学者还未对胃癌不同组织分型作较大样本的独立性研究，探讨PTEN基因突变及其蛋白表达在胃癌分型中的差异及临床病理学研究将有助于 评估PTEN在胃癌肿瘤发生发展中的作用。2PTEN基因突变及其表达与胃印戒细胞癌的临床病理学研究材料与方法(MaterialsandMethods)1.材料1.1病例收集收集1997-2008年兰州军区乌鲁木齐总医院及石河子大学第一附属医院手术切除的 胃癌标本105例，其中男性63例，女性42例，年龄30-82岁，中位年龄65

7、岁。每例 均取胃癌组织及癌旁正常胃组织，所有病例经HE染色确诊。分为管状腺癌，低分化腺 癌，粘液腺癌及印戒细胞癌;其中侵及浆膜67例,未侵及浆膜38例;淋巴结转移者62例,无转移者43例。TNM分期：Ⅰ期26例，Ⅱ期42例，Ⅲ期31例，Ⅳ期6例。所有患者无肿瘤家族史，患者术前均未进行任何抗癌治疗。标本均经病理检查确诊，经37%福尔马林固定、脱水、常规石蜡包埋。（见附录1）1.2主要试剂(1)即用型PTEN/MMAC-1鼠抗人单克隆抗体（MAB-0369）(福州迈新)(2)即用型免疫组化UltraSensitiveTMS-P超

8、敏试剂盒(福州迈新) (3)对二甲氨基偶氮苯（DAB-0031）显色剂及阳性对照(福州迈新) (4)即用型免疫组织化学超敏S-P试剂盒（KIT-9701）(福州迈新) (5)Mayer’s苏木素复染液（CTS-1099）(福州迈新) (6)2.7PBS缓冲液（PBS-0060）(福州迈新)