生物化学技术原理及应用

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1、释空觫断答:词g填f判简.^L2-0^4-生物化学技术原理及应用题：（0.5分/空，共20分）:（2分/个，共10分）题：（1分/题，共20分）题：（10分/题，共50分）第一章生物大分子物质的制备一.相关概念：1.抽提：用抽提液（常用缓冲液，稀酸，稀碱，有机溶剂例如丙酮，乙醇）进行反复萃取，将原料中有效成分最大限度分离出来的过程。二.知识点：1.理想抽提液具备：有效成分溶解度大，杂质不溶解或溶解度很小，来源广泛，价格低廉，操作安全。2.影响有效成分抽提的因素：溶液PH（偏离等电点的稳定范闸内），离子强度（极性人在离子强度髙，极性小在离子强度低），温度（低温

2、0摄氏度时最稳定），搅拌（促使抽提物抽提液相互接触，增加溶解度，采川温和适中的速度，速度慢起不到搅拌作川，述度快产生气泡，使酶变性失活）氧化（氧化剂氧化分子与巯基导致失活，加入还原剂防止氧化），水解酶（蛋白受本夂固有水解酶影响，加入抑制剂后使水解酶丧失活性），金属离了（蛋a与金属离了结合生成沉淀釔合物，用无离了水或重蒸水配制试剂，配制试剂屮加1〜3mmOl/Lm）TA）,抽提液与抽提物比例（5:1，抽提液过多冇利于冇效成分提取，不利于纯化程序。否则，反之）。3.浓缩常用方法沉淀法，吸附法，超过滤法，透析法，离心法，千燥法。4.影响生物大分子保存的主要因素空气

3、（隔绝），温度（低温方面），水分，光线，样品的PH,时间。第二章离心一.知识点：1.离心的基本原理：生物样品悬浮液在高速旋转下，在巨大的离心力作用下，离心力大于悬浮力，使悬浮颗粒以一定的速度沉降下来。2.离心力表示方法：rpf3.离心机的种类：普通离心机（转速小于1000）,高速离心机，超速离心机（转速大于2000）。4.离心机主要构件：转子，离心管5.离心基本方法：沉淀离心，差速离心，密度梯度离心6.离心机操作时注意：（1）转速设定，离心力〉悬浮力/2。（2）对称于屮心的两个离心管重量要平衡。（3）加样量勿超过3/4。（4）对于低温离心机要预先设置低温。（

4、5）离心过程中注意听声音，看仪表。第三章电泳技术一.相关概念：1.电泳：带电颗粒在电场作用K,向着与其电荷相反的电极移动的现象。2.电泳迁移率：带电粒了在单位吋间内移动的距离叫电泳迁移率。3.电渗现象：液体层相对于介质移动的现象。4.两性电解质：所带电荷随着溶液酸碱度的变化而变化，酸性溶液中带正电荷，碱性溶液带负电荷。5.印迹：将生物人分子凝胶转移到物像载体上。二知识点：1.影响电泳分离的主要因素内因：分子量大小，分子形状，分子性质，很HiiVf量，分子宜挽。外因：电场强度，溶液PH,溶液黏度，离子浓度，缓冲液性质。2.琼脂糖凝胶聚合原理：依靠琼脂糖上的羟基

5、，迕聚合过程中，羟基与羟基上的氢键的聚合。3.PAGE的组成，聚合原理及聚合方式[1]组成：丙烯酰胺（单体）和甲撑双丙烯酰胺（双体交换剂）组成。[2]原理：丙烯酰胺（单体）和叩撑双丙烯酰胺（双体交换剂）为材料，在催化剂作用下，聚合为含酰胺棊侧链的脂肪族长链，在相邻长链之间通过甲撑桥连接而形成的三维网状结构物质。[3]聚合方忒：（1）化学聚合法：加入过硫酸铵，当丙烯酰胺，交联剂，四中基乙二胺的水溶液巾加入过硫酸铵，立即产生自由基，丙烯酰胺与A由基作用，随之活化。（2）光催化法：B2作为催化剂，光聚合过程在光激发下催化完成，核黄素在氧及紫外线作用下，生成含由棊的

6、产物，与上述AP作用相同。1.PAGE分离样品时的三种效应：浓缩效应，分离效应，电荷效应。2.SDS-PAGE电泳（变性凝胶电泳）主要成分的作用：（1）k汕或蔗糖：密度大，与样品结合，不发生漂样。（2）SDS:与蛋白质结合，破坏高级结构，破坏氢键，去除蛋白质带电荷差异。（3）巯基乙醇：破坏二硫键，使完整结构变松散。（4）溴酚蓝：电泳指示剂。3.等电聚焦电泳基本原理：小分子进入凝胶A部，流下吋路程较长，而大分子物质却被阻排在外部，下来的路程短。4.等电聚焦电泳的基本原理：蛋白质等电点不冋，在冋一PH下带电荷量不同从而进行分离。5.2D_PAGE的操作顺序：先等

7、电聚焦电泳，PfSDS-PAGE.6.Westernblotting的操作步骤：（1）对蛋白质样品电泳分离（2）转膜（3）封闭（4）加入一抗与目的蛋□结合（5）加二抗（6）洗膜（7）膜的光分析。第四章沉淀法一相关概念：1.沉淀：溶液屮的物质巾液相变成同相析出的过程。二知识点：1.制备蛋白质常用的沉淀方法（1）.盐析法:中性盐的亲水性大于蛋白质和酶分子的亲水性;加入中性盐后，破坏了水膜暴露出疏水区域；同时乂中和了电荷，破坏了亲水胶体。（2）有机溶剂沉淀法：破坏蛋白质分子表面水化膜；降低水溶液的介电常数，增加蛋白质分子间的相互作用而使溶解度降低。（3）蛋白质沉淀

8、法（4）聚乙二醇沉淀法：有机物与生物大分了•发生共沉