rtca技术原理及应用

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1、郑敏xCELLigence技术的原理及其应用简介杭州高通量新药筛选中心浙江大学医学院附属一院简介传统基于细胞水平的研究方法的局限性ACEA公司的解决方法技术平台:基于微电子传感器技术，通过实时监测阻抗的变化来进行实时的细胞分析操作原理:实时细胞分析我们监测的指标xCELLigence系列产品RTCA检测的特点应用范例独特的应用：RTCA心脏系统总结:RTCA技术的优势xCELLigence技术介绍大纲传统细胞毒性/活力检测方法工作原理及检测流程细胞培养MTTCVKT加入MTT孵育加入有机溶剂孵育加入CVTK孵育测

2、吸光度数据处理分析单个时间点信息结果反复，不稳定新的未知蛋白/药物/基因的作用难以优化条件耗费大量时间，经费重复实验，优化条件没有直观信息做问题分析DNADamagingDNADamagingRTCA实时动态监测细胞毒性反应检测流程细胞接种细胞增殖外界因子加入细胞效应RTCAMTT实时无标记全自动细胞接种药物处理数据分析自动实时动态检测及数据分析RTCA实时无标记检测细胞接种药物处理标记&终点检测传统终点检测数据分析1-24小时BlackBox细胞毒实验-传统终点VS实时无标记检测微电子阻抗感应器在细胞生物学中的

3、应用ZZ=Z0Z=ZcellAddCellselectrodeswithoutcellselectrodesattachedwithcells检测原理基于微电子阻抗技术的细胞检测技术Z细胞指数和细胞数的关系160008000500100020004000125250CellNumberCellNumberCellIndex8.34.61.90.90.510.30.220.13CellIndex0min5min20min细胞指数和细胞粘附力及形态的关系xCELLigence系统系列产品RTCA1*96RTCA6*9

4、6RTCA3*16&CIMRTCA1*384RTCARTCAHTSystemRTCACardioInstrumentxCELLigence系统系列产品的匹配电子板TreatmentTreatment时间点选择在细胞试验中重要性不同的细胞状态对于处理因素有不同的反应RTCA系统使接种细胞后的对于细胞的检测可持续进行RTCA为最佳处理时间的选择提供了依据TraditionalCellAnalysisMethodRT-CAAssay不同时间点肿瘤细胞对抗肿瘤药物的反应性Vehicle33nM67nM100nM150nM

5、230nM340nM500nMVehicle33nM67nM100nM150nM230nM340nM500nMxCELLigence系统的应用细胞增殖和细胞毒性试验细胞贴壁和铺展受体-配体间相互作用RTKsGPCRsIgEreceptorNK细胞介导的杀伤肿瘤细胞肿瘤细胞的迁移和侵袭siRNA文库筛选心脏细胞功能和毒性监测病毒CPE及中和实验的监测细菌毒素介导的细胞病变的监测……利用xCELLigence系统进行细胞质控A549PC3“HeLa”细胞生长曲线来源于4个不同的实验室和ATCCATCCLab1*Lab

6、2*Lab3Lab4*Theselabswerefromthesameinstitute应用xCELLigence系统研究TCRPStaurosporine5-FluorouracilTimedependentcellularResponseProfiling，TCRP时间依赖的细胞反应特征性图谱TCRPwithKnownMechanismsShort-TermResponseLong-TermResponseAnti-mitoticsProtein-SynthesisDNADamagingNuclearHorm

7、oneHDACInhibitorsSerotoninReceptorAntagonistL-TypeVoltage-gatedCaChannelInhibitorAnti-HistamineShort-TermResponseLong-TermResponseAnti-mitoticsProtein-SynthesisDNADamagingNuclearHormoneHDACInhibitorsSerotoninReceptorAntagonistL-TypeVoltage-gatedCaChannelInhib

8、itorAnti-HistamineTCRPwithKnownMechanisms利用TCRP进行药物筛选Seed4000A549CancerCellsin96wellE-PlatesTreatwithCompoundsatafinalconcentrationOf20mMMonitorthecellularresponsefor48hoursComparecytolog