人类y染色体sry基因的鉴定

《人类y染色体sry基因的鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、一、背景介绍SRY基因又称为雄性的性别决定基因，指丫染色体上具体决定生物雄性性别的基因片段。人的SRY基因位于YP11.3,只含有一个外显子，没有内含子，转录单位长约1.1kb，编码一个204氨基酸的蛋白质。由于SRY蛋白含有一个典型的DNA结合结构域：高泳动类非组蛋白(highmobiIitygroup,HMG)盒基序，类似于已知的转录因子，所以推测SRY编码一个转录因子。SRY的HMG域以一种序列特异的方式与DNA相结合，在双螺旋结构中引入一个尖锐的转折。有证据显示，性反转病人HMG域中的突变可分为两类：影响DNA结

2、合和影响DNA弯曲的，提示这两种性质对于SRY蛋白行使转录调节功能来说都很重要。已发现HMG域在体外能以高亲和力与钙调素(Calmodulin,CaM)相结合。这一现象的功能意义不明，但提示SRY的活性可能受另一个层次的调控。SRY在成年小鼠生殖细胞中表达为一环状转录物，在发育中的小鼠性腺里则转录为一个长4.8kb的RNA，所用的启动子也与成年鼠不同。SRY于大约交配后10.5-11天(dayspostcoitum,dpc)的生殖嵴中专一开启，正好是两性间出现可观察的形态学差异之前;于12.5dpc左右关闭。因此SRY的

3、功能是启动睾丸分化而不是维持睾丸存在。LoveII一Badge认为SRY起一种感受态因子的作用。因为有些小鼠虽然有SRY的表达，但未能把细胞定型到雄性途径。相反在完全没有SRY的情况下，有时卵巢组织也能逆转成睾丸。目前，已经在所有哺乳动物包括有袋目动物中发现了SRY基因。在不同的物种中，SRY蛋白的HMG域高度保守，但是即使是在有亲缘关系的物种之间，SRY蛋白的其余部分也并不同源。还不肯定这是否意味着HMG域是SRY蛋白中唯一功能上重要的区域。丫染色体上95%是男性特异区域，里面含和男性有关的基因，通共有156个转录单位

4、，有78个编码蛋白质的基因，最后是27个完全不同的蛋白。约10%的基因是近几百万年才从X染色体移到丫染色体上来，还有20%是更早以前来自于X染色体，其余是一些回文结构。象中文诗词玩文字游戏一样，DNA的回文也是顺过来和倒过去读都是一样的序列。佩基等发现丫染色体的男性特异区域重复有回文结构，这是以前科学家们没有预计到的。在技术上，重复结构给测序带来很多困难。在科学上，这些重复回文结构的发现对于理解丫染色体有很大帮助。有研究发现：丫染色体有许多重复回文结构的序列，并且这些重复的回文结构有DNA重组能力(具体说叫“基因转换”)

5、，丫染色体自己的一段和另外一段之间进行重组，这样靠自我重组来获得活力。这是第一次知道丫染色体在其男性特异区域有重组，以前这段DNA被称为非重组区域，现在也就改名叫男性特异区域了。这个自我重组能力是进化过程中丫用来自救的重要机制。大规模srt基因的基因转换在每一代男孩出现，而且猜想常染色体和X染色体上说不定也有些区域有基因转换，给其它染色体也可能增加“活力”。二、实验原理本实验将通过PCR扩增技术，对SR丫基因进行扩增，以此验证性别。聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction,PCR)是体外核酸扩增技术。

6、

7、丨它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍，使肉眼能直接观察和判断。PCR由变性一退火（复性）一延伸三个基本反应步骤构成。模板DNA的变性：模板DNA经加热至94°C左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至40~6（TC左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；引

8、物的延伸：DNA模板一引物结合物在DNA聚合酶的作用下，于72"C左右，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性一退火一延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2〜4分钟，2〜3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。琼脂糖凝胶电泳是利用不同分子量的DNA在琼脂糖凝胶电厂中电泳速度不同而分离DNA片段的方法，琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用主要依据它们的相对分子质量及分子构型，同时与凝胶的

9、浓度也有密切关系。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构型。在凝胶中，DNA片段（小于20kb）迁移距离（迁移率）与碱基对的对数成反比，因此通过已知大小的