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时间:2018-10-27
《小议应用dna微阵列技术探究三氧化二砷对rpmi 8226细胞的功能》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、小议应用DNA微阵列技术探究三氧化二砷对RPMI8226细胞的功能:王梦昌,刘陕西,刘蓬勃【三氧化二砷[]目的:应用cDNA芯片技术探究三氧化二砷对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226的功能。方法:采用包含4096个人类基因的cDNA表达谱芯片,检测三氧化二砷功能于RPMI8226细胞24h前后其基因表达的变化。结果:在mRNA水平上,273个基因的表达发生了明显改变,其中121个基因表达上调,152个基因表达下调。结论:三氧化二砷可引起RPMI8226细胞株一系列基因表达的改变。ZFYVE16、TXNIP及ALK1基因可能和RPMI8226细胞的分化和凋亡密切相关。 []三氧化二砷
2、;DNA微阵列;多发性骨髓瘤 ChangesofgeneexpressionprofileofmultiplemyelomacelllineRPMI8226treatedbyarsenictrioxide ABSTRACTObjective:ToparethechangesofgeneexpressionprofilesofmultiplemyelomacelllineRPMI8226beforeandafter24hourinterventionofarsenictrioxide.Methods:TheresponsesoftheRPMI8226cellstoarsenictr
3、ioxideinedicroarrayangenes.Results:Ofthese4096genes,theexpressionsof273genesRNAlevel.Theexpressionsof121genesberofgenes.ZFYVE16,ALK1andTXNIPgenesmayplayimportantrolesinapoptosisanddifferentiationofRPMI8226cells. KEYM)是一种浆细胞恶性增殖性疾病。由于MM瘤细胞的增殖比例很低及多药耐药的形成,目前临床治疗该病仍十分困难,迄今为止尚无根治的方法。最近的临床资料显示,三氧化二
4、砷对MM有一定的治疗效果,且无严重的毒副功能[1,2]。为探寻三氧化二砷治疗MM的功能机制,本实验应用DNA微阵列技术探究三氧化二砷功能于MM细胞株后对其基因X络的调控功能。 1材料和方法 1.1材料(1)三氧化二砷,购自中国药品公司,样品溶于RPMI1640培养基(美国Gibco公司产品),灭菌分装备用,存储浓度为35mg/L,使用时稀释为工作浓度2μmol/L。(2)RPMI8226细胞,为人类MM细胞株,由西安交通大学第一医院血液中心提供。 1.2细胞培养取RPMI8226细胞按1×105/ml浓度分别接种于含及不含2μmol/L三氧化二砷的新鲜RPMI1640培养基中(
5、内含10%小牛血清、1mmol/L谷氨酰胺、1mmol/L丙酮酸、100U/ml青霉素、100U/ml链霉素),于37℃、5%CO2培养箱中培养24h后收集细胞。 1.3总RNA的提取按照TRIzolReagent(美国Gibco公司产品)说明书进行操纵,提取RPMI8226细胞总RNA,采用OligotexmRNAMidiKit(荷兰QIAGEN公司产品)纯化mRNA,应用RNA电泳及分光光度仪测定光密度(opticdensity,OD)值,计算OD260/OD280值以鉴定mRNA质量。 1.4探针标记按美国Biostar公司芯片杂交试剂盒说明书操纵。分别等量混合未使用三氧化
6、二砷干预的RPMI8226细胞总RNA及已使用三氧化二砷干预24h后的RPMI8226细胞总RNA,各提取50μg逆转录合成cDNA。采用荧光染料Cy3dCTP标记未使用三氧化二砷干预的RPMI8226细胞cDNA,Cy5dCTP标记已使用三氧化二砷干预24h后的RPMI8226细胞cDNA,S200纯化柱纯化cDNA。 1.5DNA微阵列制备DNA微阵列包含4096个基因cDNA(上海博星基因芯片有限公司提供,型号BiostarH40s),包括癌基因、抑癌基因、细胞信号转导基因、凋亡相关基因及阴性对照等。采用通用引物进行多聚酶链反应(polymerasechainreaction
7、,PCR)扩增。使用美国Cartesian公司的Cartesian点样仪及美国Telechem公司的硅烷化玻片进行点样。玻片经水合、干燥、紫外线交联后,分别采用2g/L十二烷基硫酸钠(sodiumdodecylsulfate,SDS)、水和2g/L硼氢化钠溶液处理10min,晾干备用。 1.6杂交及洗涤DNA微阵列在95℃水浴中变性2min,混合探针在95℃水浴中变性30s,将混合探针加于DNA微阵列上,42℃杂交16~18h,按顺序使用2×氯化钠/柠檬
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