伊马替尼、达沙替尼及其衍生物的研究

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1、伊马替尼、达沙替尼及其衍生物的研究——PTKs抑制剂的简单分类举例&仿制药研制流程导览伊马替尼Imatinib·第一个分子靶向治疗的抗肿瘤药·分类：Type2小分子抑制剂主要识别激酶的非活性构象，即DFG-out构象。·主要识别靶点：Bcr-Abl蛋白激酶一种非受体型酪氨酸蛋白激酶，由BCR-ABL融合基因表达，是慢性粒细胞白血病（CML）的重要标志。其通过磷酸化和活化一系列下游底物，促使CML成熟粒细胞无限增生。BCR-ABL在正常细胞中不表达，所以它是治疗CML理想的药物靶标。·作用特点：只

2、对BCR-ABL(IC50=207nmol/L)起作用，而对其他PTKs作用很弱。从而能抑制CML祖细胞的增殖，而正常细胞则不受损害。·作用机理：ATP的竞争性抑制剂伊马替尼Imatinib伊马替尼Imatinib高度特异性易产生耐药突变作用机理伊马替尼Imatinib·突变原因：BCR-ABL蛋白激酶区发生特异性的点突变·主要表现：1、T315突变为异亮氨酸，较为普遍-影响Imatinib与Abl形成氢键，从而阻碍二者结合-不影响Abl与ATP的结合，从而导致药物耐受性2、P-loop构型改变

3、，最为普遍-G250E、Q252R、Y253F/H和E255K/V等突变所造成-占总体突变的36~48%-临床数据表明，P环突变的Bcr-Abl激酶对Imatinib的敏感性约是野生型Bcr-Abl激酶的1/70~1/100急需无耐受性小分子抑制剂的新突破达沙替尼Dasatinib·针对Imatinib的耐药性而发展的第二代Abl激酶靶向药物·临床上用于治疗CML、血液肿瘤及实体瘤治疗·分类：Type1小分子抑制剂-作用原理：主要模拟ATP的腺嘌呤环，通过与激酶铰链区的ATP结合位点形成1~3个

4、氢键来对激酶的DFG-in构象进行识别-结构特点：含有一个杂环结构来占据腺嘌呤活性位点，并能提供与疏水口袋Ⅰ和Ⅱ相互作用的2个侧链·主要识别靶点：Bcr-Abl激酶及Src激酶注：Src激酶是人体内最大的非受体型酪氨酸激酶家族，可调节多种细胞过程·作用机理：ATP的竞争性抑制剂达沙替尼Dasatinib达沙替尼Dasatinib3个氢键：Met318的羰基氧和达沙替尼酰胺键氮上氢Met318的氨基氢和达沙替尼噻唑环上的氮噻唑环与嘧啶环之间的氨基氢和Thr315氨基酸上羟基的氧不可抑制T315I突

5、变体避开与Bcr-Abl蛋白的P环结合，无高度特异性从而可以克服Bcr-Abl的耐药突变体作用机理仿制药研制流程导览仿制药：与被仿制药具有相同的活性成分、剂型、给药途径和治疗作用的替代药品，具有降低医疗支出、提高药品可及性、提升医疗服务水平等重要经济和社会效益。以达沙替尼为先导化合物的小分子抑制剂研究流程一、化合物的设计选取Abl及Src双重抑制作用的达沙替尼进行骨架跃迁，其噻唑环为母核结构，如下所示：电子等排体替换N、O、S等芳杂环和芳香环均已被专利保护！-母核：硒唑环-侧链：R1：保留达沙替

6、尼的取代苯氨基R2：拟令为甲酰芳香环。-最终的选取：R1：2,4-二甲基苯基氨基、2-甲基苯基氨基、2-氯-6-甲基-苯基氨基和3,4-亚甲二氧基苯基氨基，2-萘基氨基等6种R2：芳香族侧链以及脂肪族侧链共设计了30个化合物。一、化合物的设计一、化合物的设计一、化合物的设计二、化合物的合成与结构验证一共成功合成了20种化合物验证方法：核磁共振氢谱技术（HNMR）：氢原子具有磁性，如电磁波照射氢原子核，它能通过共振吸收电磁波能量，发生跃迁。用核磁共振仪可以记录到有关信号，处在不同环境中的氢原子因产

7、生共振时吸收电磁波的频率不同，在图谱上出现的位置也不同，各种氢原子的这种差异被称为化学位移。利用化学位移，峰面积和积分值以及耦合常数等信息，进而推测其在碳骨架上的位置。质谱分析技术（MS）：用电场和磁场将运动的离子（带电荷的原子、分子或分子碎片，有分子离子、同位素离子、碎片离子、重排离子、多电荷离子、亚稳离子、负离子和离子－分子相互作用产生的离子）按它们的质荷比分离后进行检测的方法。测出离子准确质量即可确定离子的化合物组成。二、化合物的合成与结构验证二、化合物的合成与结构验证二、化合物的合成与结

8、构验证二、化合物的合成与结构验证二、化合物的合成与结构验证三、化合物的活性测定：酶水平抑制活性的评价方法：-测量化合物对激酶的抑制率-测量活性化合物的IC50注：IC50：被测量的拮抗剂的半抑制浓度公式如下：-抑制率%=(样品液孔读数－空白孔读数)/(酶原液读数－空白孔读数)*100%-Y=本底+(最大值-本底)/(1+10^((LogIC50-X)*斜率))注：Y为吸光值，X为样本梯度浓度值三、化合物的活性测定：1、初筛大部分化合物对Abl激酶、Src激酶均有抑制作用，其中化合物1、3、5、8