细胞库建立标准

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1、细胞库建立概况一、对细胞库细胞基质总的要求(一)细胞系／株历史资料1．细胞系／株来源资料应具有细胞系／株来源的相关资料，如细胞系／株制备机构的名称，细胞系／株来源的种属、年龄、性别和健康状况的资料。这些资料最好从细胞来源实验室获得，也可引用正式发表文献。人源细胞系／株须具有细胞系／株的组织或器官来源、种族及地域来源、年龄、性别及生理状况的相关资料。动物来源的细胞系／株须具有动物种属、种系、饲养条件、组织或器官来源、地域来源、年龄、性别、病原体检测结果及供体的一般生理状况的相关资料。2．细胞系／株培养历史的资料应具有细胞分离方法、细胞体外培养过程及建立细胞系

2、／株过程的相关资料，包括所使用的物理、化学或生物学手段，是否有外源添加序列，以及细胞生长特征、生长液成分、选择细胞所进行的任何遗传操作或选择方法等。同时还应具有细胞鉴别、检定、内源及外源因子检测结果的相关资料。应提供细胞培养液的详细成分。如使用人或动物源成分，如血清、胰蛋白酶、水解蛋白或其他生物学活性的物质，应具有这些成分的来源、制备方法、质量控制、检测结果和质量保证的相关资料。(二)细胞库的建立细胞库的建立可为生物制品的生产提供已标定好的、细胞质量相同的及能持续稳定传代的细胞种子。1．原材料的选择建立细胞库的各种类型细胞的供体均应符合细胞库细胞的检定中相

3、关规定。神经系统来源的细胞不得用于生物制品生产。培养细胞用牛血清应来源于无牛脑海绵体脑病流行地区的健康牛群，其质量标准应符合规定(附录XIIID)。不得使用人血清作为细胞培养液。如需使用人血白蛋白，则须使用有批准文号的合格制品。消化细胞用胰蛋白酶应进行检测，证明其无细菌、真菌、支原体或病毒污染。特别应检测胰蛋白酶来源的动物可能携带的病毒，如细小病毒等。用于生物制品生产的培养物中不得使用青霉素或β-内酰胺(β-Lactam)类抗生素。2．细胞培养操作的要求细胞培养生产人员应定期检查身体。在生产区内不得进行非生产制品用细胞或微生物的操作；在同一工作日进行细胞操

4、作前，不得操作或接触有感染性的微生物或动物。3．建立细胞库细胞库为三级管理，即原始细胞库、主细胞库及工作细胞库。如为引进的细胞，可采用主细胞库和工作细胞库组成的二级细胞库管理。在某些特殊情况下，也可使用主细胞库一级库，但须得到国务院药品监督管理部门的批准。(1)原始细胞库(PCB)由一个原始细胞群体发展成传代稳定的细胞群体，或经过克隆培养而形成的均一细胞群体，通过检定证明适用于生物制品生产或检定。在特定条件下，将一定数量、成分均一的细胞悬液，定量均匀分装于安瓿，于液氮或一130℃以下冻存，即为原始细胞库，供建立主细胞库用。(2)主细胞库(MCB)取原始细胞

5、库细胞，通过一定方式进行传代、增殖后均匀混合成一批，定量分装，保存于液氮或一130℃以下。这些细胞必须按其特定的质控要求进行全面检定，全部合格后即为主细胞库，供建立工作细胞库用。(3)工作细胞库(WCB)工作细胞库的细胞由MCB细胞传代扩增制成。由MCB的细胞经传代增殖，达到一定代次水平的细胞，合并后制成一批均质细胞悬液，定量分装于安瓿，保存于液氮或一130℃以下备用，即为工作细胞库。冻存时细胞的传代水平须确保细胞复苏后传代增殖的细胞数量能满足生产一批或一个亚批制品。复苏后的传代的水平应不超过批准的该细胞用于生产的最高限定代次。所制备的WCB必须经检定合格

6、，方可用于生产。4．细胞库的管理每种细胞库均应分别建立台账，记录放置位置、容器编号、分装及贮存安瓿数量，取用记录等。细胞库中的每支细胞安瓿均应注明细胞系／株名、代次、安瓿号、冻存日期，贮存容器的编号等。冻存的细胞存活率应在90％以上。冻存后的细胞，应至少做一次复苏培养并连续传代至衰老期，检查不同传代水平的细胞生长情况。主细胞库和工作细胞库分别存放。非生产用细胞应与生产用细胞严格分开存放。(三)细胞库细胞的检定细胞检定主要包括以下几个方面：细胞鉴别、外源因子污染和内源因子的检测、致瘤性检测等。必要时还须进行细胞染色体核型检查。这些检测内容对于MCB细胞和WC

7、B细胞均适用。建立细胞库的实验室应至少进行一次MCB细胞的全面检定，检定应包括：细胞鉴别试验，细菌、真菌检查，支原体检查，外源病毒因子检查等。每次建立WCB后，均应按规定项目进行检定。1．细胞鉴别试验新建细胞系／株、细胞库(MCB和WCB)和生产结束时的细胞应进行鉴别试验，以确认为本细胞，无其他细胞的交叉污染。细胞鉴别试验方法有多种，包括细胞遗传检测(如特征染色体标志)、遗传标志检测(如DNA指纹图谱、STR图谱、基因组二核苷重复序列)、免疫学检测(如组织相容性抗原、种特异性抗血清)和生物化学鉴别法(如同工酶试验)等。可选其中一种或几种方法，但均须经国家药

8、品检定机构认可。细胞表型特征与遗传学特征相结合来判断，更有利于细胞