伤寒vi多糖疫苗

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1、伤寒Vi多糖疫苗4.内容：4.1产品名称及剂型4.1.1产品名称：伤寒Vi多糖疫苗4.1.2产品剂型：液体剂型剂型4.2产品概述：本品系用伤寒沙门菌培养液纯化的Vi多糖，经用PBS稀释制成，不含防腐剂。用于预防伤寒。4.3生产工艺流程图：菌种（Ty2株CMCC50098）↓传代（1代、2代）↓小罐液体培养↓大罐液体培养↓杀菌、去菌体、收集多糖↓纯化↓除菌过滤↓原液检定↓稀释↓半成品检定↓分装↓成品检定↓包装↓成品4.4生产、分包装和检定操作过程及工艺条件：4.4.1菌种生产用菌种应符合《中华人民共和国药典》

2、2010年版三部中“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。4.4.1.1菌种名称生产用菌种为伤寒沙门菌Ty2株CMCC50098。4.4.1.2工作种子批的建立工作种子批菌种来源于主种子库菌种。主种子库菌种经开启，传代扩增后冻干，冻干菌种经检定合格后为工作种子批。4.4.1.2.1主种子库菌种传代主代冻干菌种启开后传一代于肉汤琼脂培养基，35～37℃培养16～20小时；传二代于肉汤琼脂培养基，35～37℃培养16～20小时。4.4.1.2.2工作种子批菌种的冻干制备生长良好的二代菌种，混悬于脱脂牛奶

3、保护剂中冻干。4.4.1.2.3工作种子批菌种的检定4.4.1.2.3.1培养特性及染色镜检菌种接种于pH7.2～7.4的肉汤琼脂培养基35～37℃培养16～20小时，应为无色半透明、边缘整齐、表面光滑湿润的圆形菌落。染色镜检应为革兰阴性杆菌。4.4.1.2.3.2生化特性接种葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、乳糖、蔗糖于35～37℃培养5～7日，发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇（产酸不产气）；不发酵乳糖、蔗糖（现行版《中华人民共和国药典》三部中附录ⅩⅣ）；氧化酶试验阴性。4.4.1.2.3.3血清学特性（1）玻片凝集试验

4、将在35～37℃培养16～20小时的活培养物与伤寒Vi及O－9、H－d参考血清做玻片凝集试验，与Vi及H－d参考血清有强凝集反应（+++以上），与O－9参考血清不产生凝集或仅有较弱凝集反应。（2）定量凝集试验将在35～37℃培养16～20小时的活培养物，用PBS制成6.0×108/ml的菌悬液，加入终浓度为0.5%甲醛溶液，杀菌后的菌液，与伤寒Vi参考血清作定量凝集试验；另取经100℃30分钟加热杀菌的菌液，与伤寒O参考血清作定量凝集试验。充分摇匀后，放37℃过夜，以肉眼观察结果，出现（+）凝集之血清最高稀

5、释度为凝集反应效价。凝集效价应不低于血清原效价之半。4.4.1.2.4种子批的保存冻干后的主种子库菌种和工作种子库菌种保存于2～8℃。4.4.2原液4.4.2.1生产用种子工作种子批菌种启开后传一代于肉汤琼脂培养基，35～37℃培养16～20小时；传二代于肉汤琼脂培养基，35～37℃培养16～20小时；传三代于改良半综合培养基，培养3～5小时，浓度达30～50亿/ml时用于大罐培养。4.4.2.2生产用培养基采用改良半综合培养基，不含有与十六烷基三甲基溴化铵能形成沉淀的成份，见3.1。4.4.2.3培养采用

6、培养罐液体通气搅拌培养。温度35～37℃、通气量50～200L/min、pH6.8～7.4、培养6～8小时。在培养过程中及杀菌前取样进行菌液浓度测定及纯菌试验，涂片做革兰染色镜检，如发现污染杂菌则予以废弃。4.4.2.4收获及杀菌当菌液浓度达到200～320亿/ml时中止培养，取样进行菌液浓度测定及纯菌检查。按培养量的1.2%加入甲醛溶液杀菌。4.4.2.5纯化4.4.2.5.1去核酸4.4.2.5.1.1去菌体采用连续流离心法将已杀菌的培养液离心后收集上清液。4.4.2.5.1.2按终浓度0.06%～0.

7、10%加入十六烷基三甲基溴化铵，充分混匀，存放4～24小时，形成沉淀。4.4.2.5.1.3采用连续流离心法收取沉淀物，并用0.5mol/L的氯化钠溶液溶解沉淀物，搅拌2小时，使多糖与十六烷基三甲基溴化铵解离。4.4.2.5.1.4加入95%乙醇至最终浓度为25%，2～8℃静置3～24小时，离心收集澄清的上清液。4.4.2.5.2沉淀多糖于上述上清液中加入95%乙醇至最终浓度为80%，充分振摇使多糖沉淀，离心收集沉淀。沉淀物用无水乙醇及丙酮各洗2次，干燥后即为多糖粗制品。多糖粗制品应保存在－20℃以下。4.

8、4.2.5.3多糖纯化将多糖粗制品溶解于1/10饱和乙酸钠溶液中，使其浓度达5～20mg/ml；按1:2容量用冷酚（100g结晶酚溶于40ml的1/10饱和乙酸钠溶液）提取3次，离心收集上清液，并用注射用水透析；加入乙醇至最终浓度为80%，离心收集的沉淀物用无水乙醇洗2次，干燥后用灭菌注射用水溶解，即为精制多糖原液。4.4.2.6原液检定多糖原液取样进行。4.4.2.6.1鉴别试验采用免疫双扩散法（现行版《中华人