自发性高血压大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞bkca通道的活性及表达改变

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1、自发性高血压大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa通道的活性及表达改变：胡志，马爱群，田红燕，席雨涛，范力宏，王亭忠【摘要】目的观察自发性高血压大鼠(spontaneoushypertensiverats,SHR)与Cs)大电导钙激活钾通道(largeconductancecalciumactivatedpotassiumchannel,BKCa)电流及通道α亚单位表达的差异。方法实验采用16～18周龄SHR(N=20)及Cs，全细胞膜片钳技术记录全细胞总钾电流密度及BKCa电流;激光共聚焦观察BKCaα亚单位在VSMCs胞膜及胞质

2、内的分布。结果SHR较Cs胞质与胞膜的荧光强度较Cs的BKCa电流密度增加引起血管的舒张，不能抵消平滑肌细胞的肌源性收缩可能是导致高血压的发生机制之一。【关键词】高血压;膜片钳;大电导钙激活钾通道;血管平滑肌细胞　　DiseasesofMinistryofEducation,Xian710061,China)ABSTRACT:ObjectiveToobservethedifferencesinlargeconductancecalciumactivatedpotassium(BKCa)currentandexpression

3、ofBKCachannelαsubunitsinvascularsmoothmusclecells(VSMCs)isolatedfrommesentericarteriesbeteasuredin20SHRsand20Csaging.ResultsBothsystolicbloodpressureanddiastolicbloodpressureofSHRsincreasedsignificantlyparedcurrentdensityandBKCacurrentdensityofVSMCsfromSHRslyalongthe

4、plasmalemmasbutalsoextensivelyincytoplasmicregions;theaveragepixelintensityofBKCaαsubunitincytoplasmandplasmalemmasSHRsmayberelatedtothehighexpressionofBKCaαsubunits.TheVSMCsrelaxationcausedbyincreasedBKCacurrentdensitycannotcounteractmyogenictoneofartery,entofchroni

5、chypertension.　　KEYCs)已确认至少存在4种钾通道：钙激活钾通道、ATP敏感性钾通道、电压依赖性钾通道及内向整流钾通道。它们通过调节VSMCs的膜电势(membraneequilibriumpotential,Em)影响动脉的张力及直径，同时又是许多血管活性物质的作用靶点[1]。大电导钙激活钾通道(largeconductancecalciumactivatedpotassiumchannel,BKCa)是VSMCs运载外向电流的优势通道，对于调节VSMCs舒缩和负反馈调节小动脉肌源性紧张等方面有着重要意义。

6、研究表明自发性高血压大鼠(spontaneoushypertensiverats,SHRs)动脉血压水平与主动脉VSMCs的BKCa电流密度呈显著正相关，高血压的缓解使BKCa电流密度下降[1]，BKCa对胞内Ca2+敏感度增加可能是卒中倾向SHR及用左旋硝基精氨酸甲酯诱导出高血压的Cs的BKCa通道可能也存在表达及电流特性的改变，这对于阐明高血压的发病机制和寻找新的抗高血压靶点药物具有重要意义。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1实验动物和试剂实验采用16～18周龄的SHR(n=20)与gATP、4羟乙基哌嗪乙磺酸[

7、4(2hydroxyerhyl)piperazine1erhanesulfonicacid，HEPES]均购自Sigma公司;兔抗BKCaα亚单位购自AlomoneLabs公司;羊抗兔IgGFITC由华美生物工程公司提供;其余试剂均为国产分析纯。　　1.1.2溶液生理盐溶液(physiologicalsaltsolution,PSS)成分(mmol/L)：NaCl127，KCl5.9，MgCl21.2，CaCl22.4，HEPES10，dextrose12，NaOH调节pH值为7.3～7.4。无钙PSS液：除不含CaC

8、l2外，其余成分同PSS。细胞外液同PSS，记录BKCa电流时应用含1mmol/L的TEA溶液，其余成分同PSS。电极内液(mmol/L)：KCl130，MgCl21.0，MgATP5，EGTA0.5，HEPES10，KOH调节pH值为7.3～7.4。酶分离液：