广藿香内生真菌类群分析及其抗菌活性研究

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1、广藿香内生真菌类群分析及其抗菌活性研究　　[摘要]从广藿香的根、茎、叶中共分离得到72株内生真菌，根据ITS序列分析鉴定为25属40个种，其中拟茎点霉属Phomopsis、刺盘孢属Colletotrichum、镰刀菌属Fusarium为优势种群；广藿香内生真菌的分布存在明显的组织特异性，以茎中内生真菌的分布最多，占分离菌株总数的78%；活性测试结果显示共有15个属34株内生真菌至少对1种供试菌具有抗菌活性。结果表明广藿香内生真菌多样性丰富，部分菌株具有明显的抑菌活性，值得进一步深入研究。　　[关键词]内生真菌；多样性；广藿香；抗菌活性　　[Abstract]S

2、eventy-twostrainsofendophyticfungiwereisolatedfromroots，stemsandleavesofPogostemoncablinandidentifiedas40speciesof25generabasedonITSsequencesanalysis.Amongthem，Phomopsis，ColletotrichumandFusariumweredominantgenera.DistributionofendophyticfungiinP.cablinshowedobvioustissue-specificit

3、y，andmorestrainswereisolatedfromstemswithanisolationrateof78%.Thebioassayresultsindicatedthat34strainsof15generadisplayedantimicrobialactivitiesagainstatleastoneoftestbacteriaorplantpathogenicfungi.TheresultsobtainedinthisstudyshowedthatendophyticfungiinP.cablinwererichinspeciesdive

4、rsity，andsomestrainsexhibitedstrongantimicrobialactivities，whichdeservefurtherresearch.　　[Keywords]endophyticfungi；diversity；Pogostemoncablin；antimicrobialactivity　　植物内生真菌是指生长在植物体的根、茎、叶及果实等组织和器官内的一类真菌，是植物微生态系统中的重要组成成分，在进化过程中与宿主植物形成了互惠共生的关系[1]。内生真菌不但能产生结构丰富多样的次生代谢产物，已从中分离出多种生物活性物质，包括

5、抗菌、抗肿瘤、抗氧化等天然化合物[2-3]，而且对植物的生长发育、活性成分的积累及植物抗逆性具有重要影响[4]。药用植物中同样存在着大量的内生真菌[5]，中药成分的形成、种植、抗病性及道地性可能都与内生菌有密切的关系[6]，因此，研究药用植物内生真菌资源的多样性不仅可以丰富真菌资源宝库，而且对于中药资源的保护和可持续利用具有重要的意义。　　广藿香Pogostemoncablin（Blanco）Benth.为唇形科Lamiaceae刺蕊草属PogostemonDesf.植物，是十大广药之一，其入药最早记载于唐代《新修本草》和《千金翼方》中，自宋、金、元以来已广泛

6、应用于临床。它具有芳香化浊、和中止呕以及发表解暑的功能，用于胸闷不舒、寒湿闭暑、腹痛吐泻、鼻渊头痛的治疗[7]。现代药理学研究表明，广藿香具有抗菌、抗肿瘤、抗氧化、杀虫等作用[8-11]。目前，对广藿香内生真菌的研究鲜有报道，为了探讨广藿香内生真菌的多样性、群落组成及其分布特征，本研究对其内生真菌进行了系统的分离和鉴定，并对分离得到的菌株发酵粗提物进行抗菌活性研究，旨在筛选出具有良好抗菌活性的菌株，为广藿香内生真菌的资源保护和开发利用提供基础资料和科学依据。　　1材料　　1.1仪器与试剂RE-2000型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；超净工作台，上海恒益科技有

7、限公司；YXQ-WY21-600电热高压蒸汽灭菌锅，广州市华南医疗器械有限公司；THZ-C-1摇床，广州市正一科技有限公司；Mastercyclergradient5331PCR仪，Eppendof公司；EPS3501电泳仪，AmershamPharmaciaBiotech公司。氨苄青霉素、硫酸卡那霉素、二甲基亚砜（DMSO），均购自Sigma公司；Taq酶、DNA提取试剂盒，均购自大连宝生物工程有限公司；乙酸乙酯，广州化学试剂厂。　　1.2植物与内生真菌广藿香植物于2012年10月采自广东阳春市马水镇，由广东药科大学中药学院严寒静副教授鉴定为P.cablin

8、。内生真菌分离自健康的广藿香根、茎、叶