谈对中药的抑菌作用的分析

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1、谈对中药的抑菌作用的分析【】R9【】A【】1672－3783(2011)06－0348－01　　【】由真菌引起的病害防治困难，只要有部分真菌细胞不被杀死，在适宜条件下就能生长繁殖，因此本抗菌实验以真菌生长完全受到抑制来评价抑菌效果,即在较长时间(14d)仍能保持对真菌生长的抑制，才是理想的抗菌药物。目的：筛选抗龙胆叶枯病菌活性的中药。方法：以龙胆叶枯病菌（Alternariasp.）为供试菌种，对9种中药乙醇提取物进行抗龙胆叶枯病菌活性实验，采用有限稀释法，测定最低抑菌浓度。结果：9种中药乙醇提取物均有抑菌作用，其中蛇床子、川楝子提取物1

2、4d的最低抑菌浓度MIC100小于0.1g/ml。结论蛇床子、川楝子具有较强的抗龙胆叶枯病菌作用，可进一步开发为防治龙胆叶枯病药物。　　【主题词】中药杀菌剂抑菌作用分析　　　　龙胆叶枯病（Alternariasp.）是龙胆生产中的重要叶部病害，发生普遍。在龙胆及其它药材生产中对病害的防治大量使用化学药剂，导致环境污染、农药残留，影响药材的质量。我国中药资源丰富，许多中药含抑菌活性物质，从中寻找抑制植物病原菌活性物质，研制植物源新型杀菌剂，防治药用植物病害，对生产符合GAP标准中药材具有重要意义。　　目前，国内外学者在中草药抗真菌实验方面已

3、做了大量的工作，而从中筛选抗药用植物病原真菌的研究较少。本研究根据以往中药抗真菌文献报道，选出9种中药，研究其对龙胆叶枯病菌（Alternariasp.）的抑制作用。　　一材料与方法　　1.材料：1）中药：地肤子、苦参、知母、川楝子、蛇床子、大风子、苍耳子、白鲜皮、土槿皮购于哈尔滨市同泰大药房，经鉴定为正品；95%乙醇（天津泰达化工有限公司），葡萄糖（沈阳市试剂三厂），琼脂（青岛水产品加工厂）。　　2）供试菌种：龙胆叶枯病菌,从黑龙江北安栽培的粗糙龙胆GentianascabraBunge中分离纯化得到，采用从病组织分离培养，将分离得到的

4、菌种接种到PDA培养基上培养，待产生孢子后，采用单孢分离的方法对菌种进行纯化。应用柯赫氏证病法则（Kochˊspostulate）证明为龙胆叶枯病病菌，通过对分生孢子梗、分生孢子等的观察鉴定为Alternariasp.。　　3）培养基：用PDA培养基。　　2方法　　1）样品的制备：将中药样品于60℃烘干，经粉碎过20目筛，加5倍量的95%乙醇回流提取两次，2h/次，滤过，滤液减压浓缩至1g/ml（即每毫升含1g生药）。浓缩液于冰箱（0～4℃）冷藏备用。　　2）菌种活化：将保存的菌种接于PDA培养基上培养4d备用。　　3）抑菌实验：在无菌操

5、作条件下，以1g/ml生药的药液为原液，用灭菌PDA培养基稀释，分别稀释为原液的50%，40%，30%，20%，10%，5%，1%，0.8%，0.6%，0.4%，0.2%，0.1%（相当于每毫升含0.5，0.4，0.3，0.2，0.1，0.05，0.01，0.008，0.006，0.004，0.002，0.001g生药）12个浓度的药基，对照为70%乙醇代替药液配制，并控制药基中的乙醇含量在15%以下（在配制高浓度的药基前，对加入的药液挥去部分乙醇），每管接种新培养的真菌菌落边缘2mm2的真菌菌丝块，重复3次，25℃培养。每天观察接种菌落

6、生长情况，凡生长的菌落记为“”，凡完全不生长的菌落记为“-”。　　4）MIC100的确定：MIC100为杀真菌剂(fungicide)的最低抑菌浓度，菌种接种在每种药物系列梯度浓度培养基上，恒温箱中培养7d和14d，用肉眼观察，接种菌块未扩大，无细胞生长，取完全不生长管最低药物浓度为最低抑菌浓度(MIC)。　　二结果　　抗菌实验结果：9种中药乙醇提取物对龙胆叶枯病菌（Alternariasp.）的抑制作用（略）各中药乙醇提取物的最低抑菌浓度，结果中药乙醇提取物对龙胆叶枯病菌（略）　　研究表明，9种中药乙醇提取物对龙胆叶枯病病菌（Alter

7、nariasp.）均有不同程度的抑制作用，随着培养时间的延长，抑菌作用逐渐减弱，培养7d最低抑菌浓度MIC100≤0.2g/ml有地肤子、蛇床子、白鲜皮、川楝子、大风子，最低抑菌浓度MIC100≤0.1g/ml有蛇床子、白鲜皮、川楝子；培养14d最低抑菌浓度≤0.2g/ml有川楝子、蛇床子、大风子，培养14d最低抑菌浓度MIC100为0.1g/ml有川楝子、蛇床子。将药基上的菌种转接到无药PDA培养基上仍不能生长，表明真菌已被杀死，川楝子、蛇床子乙醇提取物有较强抗龙胆叶枯病菌（Alternariasp.）作用，其次为白鲜皮和大风子，可进一

8、步作田间实验。　　三讨论　　用乙醇提取抗菌活性物质优于水提法。本实验采用乙醇回流提取法，有利于生物碱等生物活性物质的提取，同时减少了提取液中蛋白质、多糖等杂质。　　本实验采用在药基上接种菌丝体