中药饮片对多重抗生素耐药细菌的抑菌作用

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1、中药饮片对多重抗生素耐药细菌的抑菌作用【摘要】口的：分析数种屮药饮片对多重耐药菌(Multidrugresistantbacteria,MDROs)的抑菌作用，总结抑菌中药饮片筛选经验。方法：以2015年1月〜12月，临床感染患者血.液标本、冲洗液、尿液、伤口分泌物屮获得并培养的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)150株、耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)500株、耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌(CRAB)300株、耐碳青霉烯铜绿假单胞菌(CRPA)150株，取黃连、黃柏、大黃、金银花、野菊花、血腥草、黄苓、雷公藤、赤芍生药饮

2、片，菌株均参照卫生部《全国临床检验操作规程》中推荐方法鉴定，接种、培养，将菌液0D稀释至1X105cfu/ml,取以上屮药材，磨成粉末、浸泡热水浴、离心、取上清液、煎汁，制得浓度为0.lg/ml生药液,釆用二倍微孔稀释法,黄苓稀释至！J40mg/ml>20mg/ml2.5mg/ml。其余采用被比稀释160mg/ml10mg/ml,进行药敏鉴定，测定最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)。结果：按照对MRSA抑菌效果MIC、醐C大小从小到大排序前分别为黄苓(MIC=20ng/ml,MBC=20ng/ml)>黄连、黄柏与赤芍

3、、大黄、野菊花鱼腥草、雷公藤、金银花；按照对MRCNS抑菌效果MIC、BMC大小从小到大排序分别为黄连(20ng/ml).黄柏、大黄、黄苓、赤芍、金银花、野菊花、鱼腥草、雷公藤，BMC从小到大分别黄连(20ng/ml)^黃柏、黃苓、大黄、赤芍、金银花、野菊花、鱼腥草、雷公藤；按照对CRAB抑菌效果MIC大小从小到大排序分别为黄连(MlC=20ng/nil)、黄柏、黄苓、金银花、大黄、金银花、鱼腥草、雷公藤、赤芍,BMC从小到大分别为黄连(BMC=20ng/ml)^黄柏、野菊花、黄苓、大黄、金银花、鱼腥草、雷公藤、赤芍；按照对CR

4、PA抑菌效果MIC、BMC大小从小到大排序分别为黄连(MIC=80ng/ml,MBC=80ng/ml).黄柏、黄苓、大黄、金银花、野菊花、鱼腥草、雷公藤、赤芍。结论：不同中药饮片煎剂对不同类型MDROs抗菌作用存在一定的差异，黄连总体抗菌效果较好。【关键词】抗生素；多重耐药菌；中药饮片全世界范围内抗生素滥用情况十分严峻，我国是抗生素使用率最高的国家[1]o细菌耐药是抗菌药物滥用的必然结果，近年來多重耐药菌真至泛耐药菌感染越来越常见，检出率不断上升⑵。相较于普通细菌感染，MDROs感染死亡风险明显增加，是普通感染的2-3倍⑶。中医

5、药诊治感染性疾病经验丰富，许多中纱被证实确实有抑菌药理学作用⑷。中医学讲究整体观，强调人与自然的相互关系，屮药具有多成分、多途径、多环节、多靶点特点，可从整体上增强机体免疫能力,可降低MDROs发病风险。中药是抗感染新药筛选、研发的重要来源，本次研究试简单的分析数种屮药饮片对MDRs的抑菌作用，总结抑菌屮药饮片筛选经验。1材料与方法1.1仪器与试剂以2015年1月〜12月，临床分离鉴定的常见MORDs菌株作为研究菌株。主要来源于感染患者感染部位，包描血液标本、冲洗液、尿液、伤口分泌物，分离与培养获得耐卬氧四林金黄色葡萄球菌(MR

6、SA)150株、耐甲氧西林凝同酶阴性葡萄球菌(MRCNS)500株、耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌(CRAB)300株、耐碳青霉烯铜绿假单胞菌(CRPA)150株，备用。中药材包括黄连、黄柏、大黄、金银花、野菊花、血腥草、黄苓、雷公藤、赤芍，均经过实验室高效液相色谱法鉴定。电子分析天平、药敏鉴定系统、植物粉碎机、电热恒温水浴锅、明胶、离心机等。1.2材料1.2.1制备菌液菌株均参照卫生部《全国临床检验操作规程》中推荐方法，采用Vitek-2compact全自动细菌鉴定系统鉴定，大肠埃希菌、肺炎克雷们菌采用K-B法鉴定。将以上四种分离鉴定

7、的MORDs菌株接种在2#培养血上。参照CLSI标准操作，取单个菌落接种于5m1LB培养液屮，37°C、150rpm,振摇培养，过夜。以LB液100u1为空白对照,将菌液0D稀释至lX105cfu/mlo1.2.2中药饮片煎剂取黄连、黃柏、大黄、金银花、野菊花、血腥草、黄苓、雷公藤、赤芍饮片,制作煎剂。粉碎机粉碎药物，磨成粉末状。电子天平紧密称量每种药物各lg,分别装入试管屮，编号。加入10mlddH20,轻轻摇匀，充分混匀，浸泡18〜20h,100水浴lh。室温内冷却到常温,离心，4000rpm,20min,取上清液，煎汁,制

8、得浓度为0.lg/ml生药液，4°C冰箱保存。实验前，采用二倍微孔稀释法，黄苓稀释到40mg/ml>20mg/ml2.5mg/mlo其余釆用被比稀释160mg/ml10mg/mlo设置阳性对照组(100111)、阴性对照(100U1Lb培养液)。采用鉴定系统配套