衍生化反相高效液相色谱法测定黄杨宁片中环维黄杨星d的含量

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1、衍生化反相高效液相色谱法测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量【摘要】　　目的建立反相高效液相色谱法（RP－HPLC）测定黄杨宁片中环维黄杨星Ｄ的含量。方法环维黄杨星Ｄ与异氰酸苯酯反应后,用RP-HPLC测定,色谱柱为ODS-C18柱;流动相为甲醇－水(84∶16);检测波长：234nm。结果衍生化反应在23.03~53.73μg·ml-1浓度范围内线性良好，r=0.9998（n＝5）,回收率均值96.1％,重复性好。结论该法准确,可靠，专属性强,可用于黄杨宁片中环维黄杨星Ｄ的质量控制。【关键词】黄杨宁片环维黄杨星Ｄ异氰酸

2、苯酯反相高效液相色谱法衍生作用　　Abstract：ObjectiveTodevelopanRP-HPLCmethodforquantitativedeterminationofCyclovirobuxineDinHuangYangNingtablets.MethodsCyclovirobuxineDreacted.Theanalysisn,themobilephaseethanol-.ResultsGoodlinearity23.03μg·ml-1to53.73μg·ml-1ofcyclovirobuxineDde

3、rivativesethodisaccurate,reliableandspecificandcanbeusedforthequalitycontrolofHuangyangningtablets.　　KeyinrophllaSieb.etZucc.var.SincaRehd.etg/片；批号060404，060406，060407），衍生化试剂异氰酸苯酯为AcrosOrganics，Belguim产品，色谱用水为蒸馏水，甲醇为色谱纯，其它试剂为分析纯。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱为岛津ODSC18柱(1

4、50mm×4.6mm)；流动相为甲醇-水(84∶16)；流速1.0ml/min；检测波长234nm；柱温为室温；进样量20μl。　　2.2测定方法　　2.2.1衍生化试剂的配制精密吸取异氰酸苯酯20μl，置10ml量瓶中，加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，即得。　　2.2.2对照品溶液的制备取环维黄杨星D对照品10mg，精密称定，置25ml量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加衍生化试剂0.2ml，摇匀，室温放置30min，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。　　2.2.3供试品溶液的制

5、备取本品20片精密称定，研成细粉，精密称取适量（约相当于环维黄杨星D10mg），置具塞锥形瓶中，加0.5％冰醋酸溶液40ml，50℃加热超声（250in（3000r/min），小心倾取上清液，残渣加适量0.5％冰醋酸溶液充分洗涤，离心6min（3000r/min），合并上清液及洗液，用氨水调pH值至9.0，转移至分液漏斗中，加三氯甲烷50ml振摇2min，待溶液完全分层后，分取三氯甲烷层，用三氯甲烷湿润的试纸滤入圆底烧瓶中，再用三氯甲烷萃取3次（40，30，30ml），分取三氯甲烷层，依次滤入烧瓶中，并用三氯甲烷洗涤

6、滤纸，滤入烧瓶中，回收三氯甲烷至适量，转移至25ml量瓶中，用三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加衍生化试剂0.2ml，摇匀，室温放置30min，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。　　2.2.4测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。　　2.2.5测定波长的选择取对照品衍生化后，在200～400nm波长范围内扫描，可见本品在230～240nm波长范围内有较大吸收，且差异不大；最终采用234nm作为本品含量测定的检测波长。　　2

7、.3线性范围测定精密称取环维黄杨星D对照品10mg，置25ml量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取0.6，0.8，1.0，1.2，1.4ml，置10ml量瓶中，各加衍生化试剂0.2ml，摇匀，室温放置30min，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取上述供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，测定线性范围，结果本品线性方程为：A=94.933C+52.419，r=0.9998（n＝5）。表明环维黄杨星D在23.03～53.73μg·ml-1的

8、浓度范围内，样品浓度（C）与峰面积（A）呈良好的线性关系。　　2.4重复性实验称取同一批号样品6份，照上述供试品溶液制备的方法制备6份，按上述色谱方法分别测定含量，结果RSD＝1.9％，重复性良好。　　2.5中间精密度取黄杨宁片，照上述供试液的制备方法，由3人，分3d，分别在不同仪器上测定同一批样品含量，结果RSD＝1.5％，精密度良好。　　2