正常心肌缺血与糖尿病心肌缺血大鼠蛋白质组的差异

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1、正常心肌缺血与糖尿病心肌缺血大鼠蛋白质组的差异：雷培培，叶财学，杨徐一，金利泰，李校【摘要】目的：运用蛋白质组学方法比较正常与糖尿病性大鼠心肌缺血再灌注损伤时心肌蛋白质组表达图谱的差异。方法：将SD大鼠随机分为心肌缺血再灌注组(IR组)和糖尿病心肌缺血再灌注组(DMIR组)。分别取各组左心室心肌蛋白进行二维电泳及凝胶染色后，用ImageMaster2DPlatinum软件对获得的蛋白图谱加以分析，寻找差异蛋白点。结果：二维电泳结果显示，IR组心肌蛋白二维电泳图谱与DMIR组相比共有29个显著差异点，其中

2、6个点表达上调，6个表达下调，17个表达不匹配。结论：IR组与DMIR组大鼠心肌的二维电泳结果显示蛋白表达图谱有明显差异，但其差异蛋白为何种蛋白、起何种功能需要进一步的质谱数据进行分析。【关键词】心肌缺血;再灌注损伤;糖尿病;蛋白质组　　Abstract:Objective:Toanalyzethedifferentialexpressionofmyocardialproteinsofdiabeticandnon-diabeticratsyocardialischemia-reperfusioninju

3、ry.Methods:Ratslyassignedtomyocardialischemia-reperfusiongroup(IRgroup)anddiabeticmyocardialischemia-reperfusiongroup(DMIRgroup).Theleftventricularmyocardialproteinensionalpolyacrylamidegelelectrophoresis(2-DE)ageMaster2DPlatinumsoftensionalelectrophores

4、isshoyocardialproteinexpres-sionofIRgroupandDMIRgroup，butassspectrometry.　　Keyyocardialischemia;reperfusioninjury;diabetic;proteomic　　糖尿病高血糖可导致多种器官的长期损害和严重的并发症，其中心脏是高血糖损伤的关键靶目标。美国的一项研究显示，糖尿病心肌病的发生率为0.76%[1]。据统计大约65%～70%的糖尿病患者死于心脏疾病[2]，且以心肌缺血较为常见。统计表明，相同年

5、龄的患者糖尿病心血管疾病导致的死亡比普通心血管疾病高2～5倍。不仅仅心血管疾病在糖尿病患者中较普通患者更常见，糖尿病性心肌缺血患者甚至比非糖尿病患者预后差[3]。二维电泳技术是蛋白质组学研究的核心技术之一，它利用了蛋白质等电点和分子质量的不同来分离复杂蛋白质组分，具有较高的分辨率和灵敏度，目前已成为复杂蛋白质组分检测和分析的一种强有力的生化技术。本研究使用二维电泳对大鼠心肌蛋白进行分离，获得心肌缺血和糖尿病心肌缺血大鼠的心脏蛋白表达图谱差异，从蛋白质水平研究心肌缺血和糖尿病心肌缺血的差异，为研究糖尿病和

6、心肌缺血的关系奠定了一定的基础。　　1材料和方法　　1.1材料与仪器　　1.1.1主要仪器：稳步型血糖仪(美国强生公司);MP150多导生理信号记录仪(美国BIOPAC公司);DN-2000型动物人工呼吸机(上海嘉鹏科技有限公司);超声波细胞粉碎机(宁波新芝股份有限公司);IPGphorTMⅢ等电聚焦仪器(美国GE公司);DYY-6C电泳仪(北京六一仪器厂);脱色摇床(北京六一仪器厂);冷冻台式高速离心机(德国eppendorf公司);SDS-PAGE垂直电泳仪(美国GE公司);PoageMaster2

7、Dplatinum6.0图像分析软件(美国GE公司)。　　1.1.2主要试剂：美国强生稳步型血糖试纸、2，3，5-氧化三苯基四氮唑(TTC)、IPG预制胶条、IPGbuffer购自GE公司;链脲佐菌素(STZ)、丙烯酰胺、甲基双丙烯酰胺、甘氨酸、十二烷基硫酸钠(Sodiumdodecylsulfate，SDS)、尿素、硫尿、过硫酸铵(N，N，N’，N’-四甲基乙二胺(N，N，N’，N’-Tetramethylethylenediamine，TEMED)、低分子量标准蛋白均购自Sigma公司，3-[3-(

8、胆酰胺基丙基)二甲氨基]丙磺酸盐;(3-(3-(Cholamidopropyl)dimethylammonio)propanesul-fonate，CHAPS)、二硫苏糖醇(DTT)、碘乙酰胺进口分装，BCA蛋白浓度试剂盒购于碧云天生物技术研究所;UPD-蛋白质染料染色试剂盒购于温州安得森生物科技有限公司。　　蛋白裂解液：8mol/L尿素，2mol/L硫脲，4%CHAPS，2%IPGbuffer，40mmol/LDTT，0.14%PMSF。