三种检测ampc酶方法的比较

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1、三种检测AmpC酶方法的比较：陈林珍，李晓穗，刘一鸣，邹燕【关键词】表型筛选法摘要:目的采用三维试验、表型筛选法及头孢西丁纸片药敏法(K-B法)同时检测肠道G-杆菌的AmpC酶，并加以比较，找出一种适合临床常规应用的检测AmpC酶的方法。方法用头孢硝噻吩法检测出97株β内酰胺酶阳性的肠道G-杆菌作为试验待测菌，用头孢西丁药敏法、表型筛选法测定细菌耐药情况，以判断产AmpC酶的情况。用三维分析法测定细菌粗提物中的AmpC酶情况。结果97株肠道杆菌头孢西丁药敏法结果显示产AmpC酶共有36株，占37.1%（

2、36/97），与三维试验比较总符合率为74.2%。表型筛选法产AmpC酶的菌株有15株，占15.5%（15/97），与三维试验比较总符合率为91.8%。结论表型筛选法与三维试验法比较差异无显著性。表型筛选法可以作为一种临床快速、简便、可靠的检测AmpC酶的方法。　　关键词:头孢西丁药敏法；三维试验；表型筛选法；AmpC酶　　Abstract:Objectiveusingthreedimensionaltaest,phenotypescreeningtaestandCefoxitinsensitivete

3、sttodetectAmpCenzymeofintestinalG-Bacillus,thenpareandsetupaneethodinclinicallaboratoies.MethodsUsingnitrocefintest97βlactamsnezymes(+)intestinalBacillusastest.Cefoxitinsensitivetestandphenotypescreeningenedtodetecttheresistancein97intestinalBacillus.The

4、threedismensionaltestsenedtodetecttheAmpCenzymesin97intestinalBacillus.ResultsTheresultsofCefoxitinsensitivetestshopCenzymes.Cefoxitinsensitivetestparedensionaltests,thetotalcoincidenceratepCenzymes.paredensionaltests,thetotalcoincidenceratepCenzymeandea

5、sytouseinclinicallaboratories.　　　　Keyensionaltests;phenotypescreening;AmpCenzymesAmpCβ内酰胺酶(简称AmpC酶)是由肠杆菌科细菌或/和绿脓假单胞菌的染色体或质粒介导产生的一类作用于头孢菌素、且不被克拉维酸所抑制的β内酰胺酶，故AmpC酶又称作为头孢菌素酶［1,2］。随着β内酰胺类抗生素、尤其是头孢菌素的广泛应用，产AmpC酶的G-杆菌越来越多见，已逐渐引起临床医师的关注［3］。我科用头孢西丁药敏法、表型筛选法、三维试验

6、检测97株肠道G-杆菌，加以比较，以找出一种合适临床常规应用检测AmpC酶的方法。　　1材料与方法　　1.1菌株　　从临床病人痰、血、尿、分泌物中分离的97株肠道G-杆菌株，质控菌株阴沟肠杆菌O29M和1194E从卫生部临检中心购得，分别作为AmpC酶阳性和阴性对照，大肠埃希菌ATCC25922为三维试验指示菌。　　1.2仪器与试剂　　M-H琼脂、肉汤由杭州天和微生物试剂公司购得，低温冰冻离心机为德国Hettich公司生产，型号：ZentrifugenD―78532Tuttlingen,恒温箱，药敏纸片

7、为OXOID公司产品。　　1.3头孢西丁（FOX）药敏法［4］　　按NCCLS标准1999版操作，待测菌株对FOX耐药，视为初筛AmpC酶阳性。　　1.4表型筛选法［3］　　按NCCLS标准1999版操作，用亚胺培南（IPM）、头孢吡肟（FEP）、头孢他啶/克拉维酸（CD02）、头孢噻肟/克拉维酸（CD03）、头孢噻肟（CTX）5种纸片进行筛选。判断标准：FEP、IPM表现为敏感，而CD02、CD03、CTX表现为耐药或在CD02、CD03和CTX的抑菌环内存在散在菌落判断为AmpC酶阳性；IPM表现为

8、敏感，而FEP、CTX、CD02、CD03均耐药，提示待测菌株产AmpC酶的同时也产生其他β内酰胺酶，如产ESBLs。　　1.5三维试验法　　1.5.1酶粗提物的制备［5］　　待测菌于肉汤中增菌，接种于M-H平板(直径为9cm)中，置于37℃恒温箱内孵育24h。刮取1/4平板的密布菌落于1mL生理盐水中混匀。-20℃反复冻溶5次,每次冻的时间不少于2h。12000r/min，4℃离心15min，取上清液，经M-H平板上常规细菌培养阴性后于-