炉栗散对糖尿病难愈性创面影响的实验研究

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1、炉栗散对糖尿病难愈性创面影响的实验研究董毅1徐哲2（1大连大学附属新平医院辽宁大连116021;2辽宁省大连市中心医院辽宁大连116031）【中图分类号】R259【文献标识码】B【文章编号】1672-5085（2010）34-0429-02【摘要】目的观察炉栗散对糖尿病难愈性创面愈合的影响。方法建立家兔糖尿病缺血创面模型，随机分成两组，分別使用炉栗散和凡士林纱条外敷，观察3、7、14天创面组织成纤维细胞数量、血清TGF-βl水平变化和创面大小的变化。结果在3、7、14天炉栗散组TGF-&be

2、ta;l水平变化和成纤维细胞数量变化均与与对照组有显著性差异，7、14天创面大小变化与对照组有显著性差异（P<0.05）。结论炉栗散组方能有效促进创面的愈合，值得在临床推广使用。【关键词】创面TGF-βl成纤维细胞糖尿病难愈性创面在临床中屡见不鲜，不但严重影响生活质量，甚至可以造成截肢等严重后果，目前对其治疗尚缺乏有效的方法。炉栗散是木人在经典方剂的基础上加减制备而成的外敷粉剂，在临床应用中能有效促进创面的愈合,通过木实验来证实其疗效，为临床应用提供理论依据。1材料与方法1.1实验动物大耳白

3、兔20只，由大连医科大学提供，体重2.5kg±100g，平静饲养一周后，依据随机表格法，分为2组，每组10只，即实验组和对照组。1.2实验药物炉栗散组方：炉甘石、黄柏、煅石膏、片栗粉、冰片等。由辽宁中医药大学制剂室制备成超微粉剂。1.3主要实验试剂和实验仪器0.1%盐酸氯胺酮（福建古田制药股份有限公司）；四氧嘧啶，试剂编号：2244-11-5,瑞士FULKA公司产品，（由太阳生物有限公司提供）；Caresens血糖仪，编号：CSPI5F01611;Caresens拭纸，编号：GA13CC

4、95C,韩国i-SENS公司产品；转化生长因子多克隆抗体TGF-βl，二抗抗体，工作浓度1:200,均由太阳生物有限公司提供；手动打孔仪，大连泛邦公司产品；BX51/52系统显微镜，日本Olympus产品。SX-100计算机图像分析仪，美国IBM公司产品。1.4方法1.4.1实验动物造模前均测定血糖和尿糖含量，超出正常剔除。于造模前一周按150mg/kg腹腔注射3%四氧嘧啶，一周后查血糖浓度大于llmmol/L以及尿糖为+++至++++吋认为糖尿病模型制作成功。同吋结扎兔耳单侧中央动脉及头侧

5、动脉总干造成缺血模型，使用活检打孔器在各组兔耳腹侧面中央制成直径1.8cm的圆形皮肤缺损创面，其中心位置距离耳尖4cm。刮除软骨膜，暴露软骨，双层油纱覆盖，双层X光片固定兔耳。创面均为单侧，每天生理盐水清洁创面后对照组外敷凡士林汕纱条，炉栗散组外敷炉栗散纱条，范围以能够覆盖创面即可。正常饮食水每天检查血糖浓度，低于llmmol/L时补注四氧嘧啶，使血糖浓度控制在ll-16mmol/L之间。1.4.2研宄方法分别于第3、7、14天取创面边缘组织，每次每只各两块，同吋抽取耳缘静脉血lml，处理及观察方法如

6、下：①成纤维细胞观察方法取一块组织置于4%多聚甲醛中固定，经水洗、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片等步骤后，制成组织切片，H-E染色，在40倍光镜下观察4个不同视野，并记数。②创面大小观察方法分别于取组织时候测量创面的大小（mm）,并记录。③TGF-βl血清浓度的观察均采取双抗夹心EUSA法，将抽取的血液3000r/m离心，提取血清，至于-20°C冰箱中保存。抗兔TGF-βl单抗包被于酶标板上，兔血清中的TGF-βl会与单抗结合，加入生物素化的抗兔TGF-βl二抗，

7、它将与结合在单抗上的兔TGF-βl结合而形成免疫复合物，未结合的将被洗去，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin将与二抗的生物素结合，多余的物质将被洗去，加入TMB染色。根据0D值查找出TGF-βl(EGF)的浓度。兔的TGF-βl(EGF)浓度与OD(450nm)成正比。2结果各组不同阶段TGF-βl水平变化见表1，炉栗散组和对照组相比在3、7、14天TGF-βl水平变化有显著性差异；不同吋期成纤维细胞数量变化见表2,炉栗散组和对照组相比在3、

8、7、14天均冇显著性差异；创面大小变化见表3,显示炉栗散组和对照组相比在3天无显著性差异，7、14天均有显著性差异。3讨论糖尿病难愈性创面也称糖尿病溃疡，因多发生在足部故称糖尿病足，是糖尿病患者常见的并发症之•-。造成糖尿病溃疡难以愈合的原因很多，可能和局部生长因子的缺乏、成纤维细胞数量减少或者微循环障碍等有关［1】。苏中对生长因子的研究是0前热点之一。有研究表明［2］:难愈性创面通常表现为修复不足，缺少生长因子的分泌可能和TGF-βl水平下降