流式细胞术免疫标记简介

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1、流式细胞术免疫标记应用简介2009-12-03流式细胞术系列讲座之——免疫标记上次流式细胞术讲座内容（概述）流式细胞术的一般介绍流式细胞术在临床检测和科研中的应用流式细胞仪可检测的细胞参数细胞结构细胞大小细胞颗粒性程度细胞表面面积核浆比例DNA含量与细胞周期RNA含量细胞功能细胞表面蛋白抗原细胞胞浆内蛋白性抗原细胞内细胞因子细胞增殖细胞内钙离子浓度免疫标记技术免疫标记技术（immunolabellingtechnique）:是指用荧光素、放射性同位素、酶、发光剂或电子致密物质等作为示踪剂，标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应。流式细胞术检测蛋白质分子：免疫荧光标记技术FACSCal

2、ibur流式细胞仪能够检测的荧光（Fluorescence）信号FL1（第一荧光）-FITC(异硫氰酸荧光素）FL2（第二荧光）-PE（藻红蛋白）FL3（第三荧光）-PerCP,PeCy5等PL4（第四荧光）-APC（藻青蛋白）双色直接染色流式细胞术免疫荧光标记的应用检测细胞表面蛋白抗原检测细胞胞浆内蛋白性抗原检测细胞内细胞因子优势：在同一细胞上同时检测多种标志血液系统各型细胞免疫标志CD34+抗原在早期造血祖细胞内呈高水平表达，随着细胞成熟其表达呈进化性下降，继而消失。CD38抗原是造血干细胞向多系定向分化的标志之一，并随一定的分化过程表达上调最近发现CD90（Thy-1）是

3、比CD34更早的干、祖细胞标志结合多种分化抗原的表达可以作为造血细胞不同发育阶段的标志。如CD34+、CD33+细胞群为多能干细胞向髓系定向的标志；CD34+、CD19+多为多能干细胞向B系定向的祖细胞。CD34+、TdT+、CD10+、CD7+则被认为是向T系定向的祖细胞。造祖/干细胞T细胞及其亚群T祖细胞（pro-T）的表型为CD34+、TdT+、CD10+、CD7+未成熟T细胞标志CD3、CD4和CD8。在T细胞发育过程中，CD7是最早出现的T细胞标志，且贯穿表达在整个T细胞分化发育过程中。胸腺细胞要分化发育为有功能的成熟T细胞，细胞表面标志需经历一定的变化过程。T细胞标

4、志进入外周淋巴器官和血液，执行免疫功能CD7+、CD2-、CD3-、CD4-、CD8-、TCR-CD7+、CD2+、CD3+、CD4-、CD8-、TCR-（即CD4、CD8双阴性）CD7+、CD1+、CD2+、CD3+、CD4+、CD8+、TCR+（即CD4、CD8双阳性）CD7+、CD2+、CD3+、CD4+、CD8-、TCR+CD7+、CD2+、CD3+、CD4-、CD8+、TCR+CD3+、CD4+、CD8-：T辅助/诱导细胞（Th/Ti），占T细胞总数的60%~70%；CD3+、CD4-、CD8+：T抑制/杀伤细胞（Ts/Tc），20%~30%；CD3+CD4+CD8+

5、：1%~3%；CD3+CD4-CD8-：1%~10%。前三种表型细胞的TCR主要为TCRαβ，而CD4-CD8-T细胞主要表达TCRγδ，他们都执行细胞免疫功能。正常外周血中通常存在的T细胞亚群CD2是绵羊红细胞受体和淋巴细胞功能相关抗原-2（LFA-2），表达于人95%T细胞、50%～70％胸腺细胞和大颗粒淋巴细胞（LGL／NK）的表面。CD3是T细胞表面抗原，表达于成熟胸腺细胞、静息和激活的的外周血T细胞，是鉴定T细胞的重要标志，其胞浆和膜CD3是早期和普通型T细胞白血病的主要分型标记。CD5、CD7是T细胞白血病较特异的标记，也是髓系白血病时最常见的伴随标记。CD45则是

6、白细胞的共同标记抗体CD25和CD28主要分布于活化T淋巴细胞表面，为活化T淋巴细胞标志。胸腺细胞、静止T细胞、静止B细胞以及NK细胞表面无表达。末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）和II类人类白细胞抗原（HLA-DR）的阳性表达对早期T细胞白血病的诊断有重要价值。80％～90％和95％以上的NK细胞表达CD16和CD56。用CD3-CD16+CD56+可定义NK细胞。B细胞标记B细胞B细胞的分化主要分为B祖细胞、前B细胞、未成熟B细胞、成熟B细胞、活化B细胞和浆细胞6个阶段。（1）B祖细胞（pro-B）：此期最早表达的B细胞特异性抗原是CD19，同时表达CD34、细胞核TdT、HL

7、A-DR、CD40、CyCD22。（2）前B细胞（pre-B）：CD34和TdT消失，出现CyCD79、CD10、CD20、CD9、CDw78、CD74，cμ+（胞浆IgM重链）。（3）未成熟（早期）B细胞（immatureBcell）：CD9、CD10消失，出现SIgM、CD22。CD20、CD24、CD40、CD72、CD74、CDw78、CD79表达增加。其他新的B抗原CD37、CD2、CDw75、CDw76相继出现。（4）成熟B细胞（matureBcell）：SIgM和IgD同时表达