细胞分子免疫学流式细胞术的原理及应用简介C

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1、流式细胞术原理及应用简介Scienceishard,FCMshouldbeeasy.BD生物科学孔祥涛Sky_Kong@bd.comBDIntroductionFCMPrinciplesBDFlowCytometersBDIntroductionBD是由MaxwellW.Becton和FairleighS.Dickinson于1897年在纽约创立的，总部设在新泽西州。MaxwellW.BectonFairleghS.Dickinson经过一百多年的发展，BD已成为世界上最大的医疗技术及医疗设备公司之一，它以领先的技术、卓越的产品质量和诚实可信的服务赢得了全球用户及合作伙伴

2、的广泛赞誉。BDIntroductionBD生物科学作为BD的一个业务组成，一直致力于为生命科学研究者和临床医生提供创新的临床和科研工具。其主要产品包括流式细胞仪；细胞图象分析系统；单克隆抗体和试剂盒；药物研发产品及临床诊断试剂等。1973年BD推出世界第一台商品化的流式细胞仪FACSIBDIntroductionTCellsResearchStemCellsBDHLA-B27KitBD生物科学——流式整体方案提供者•卓越中心CenterofExcellence（COE）——前所未有的流式4S体验–Showcase产品展示–Support技术支持–Service售后服务–S

3、urvey用户调查•BD生物科学热线电话:400-819-9900–产品咨询–技术解答–仪器维修–意见反馈–“FlyingCOE”BD生物科学——流式整体方案提供者•BD生物科学中文网–www.bdbiosciences.com/cn–内容及时更新，海量资料下载–在线联系BD支持人员•Cytometry流式技术BBS&网络课堂–www.cytometry.cn资料查询和在线讨论–两周一次专家在线讲课互动•新浪微博@BD流式资讯–好玩，好看，流式也时尚BDIntroductionFCMPrinciplesBDFlowCytometersFlowCytometryPrinci

4、ples流式细胞术（FlowCytometry,简称FCM）是一种快速、准确、客观的同时检测直线流动状态中单个细胞多项物理及生物学特性，加以分析定量的技术。检测速度快，分析样本量大在极短时间内可分析大量细胞，这是流式不同于其他细胞分析仪器的主要特点，可以每秒钟上万个细胞的速率进行测量。可检测的样本种类多样各种细胞（如外周血，骨髓，实体组织，悬浮或贴壁培养的细胞），微生物，人工合成微球。FlowCytometryPrinciples分析型流式细胞仪VS分选型流式细胞仪CaliburAriaIIIFlowCytometryPrinciples流式细胞分析仪原理FlowCytom

5、etryPrinciples前向角散射光（FSC）LaserFALSSensor当细胞颗粒通过聚集的激光束时，激光向各个方向散射。与激光束方向同轴的称前向角散射光信号（FSC）。FSC一般表征细胞相对大小及其表面积。FlowCytometryPrinciples侧向角散射光（SSC）LaserFALSSensor90LSSensor与激光束垂直的称为侧向角散射光信号（SSC）。SSC一般表征细胞粒度及细胞内相对复杂性。FlowCytometryPrinciples散射光信号，散点图(DotPlot)FlowCytometryPrinciples某些物质在特定波长范围内的光线

6、照射下，可发出波长比照射光波长长的光线-即荧光。而这些受激发后能产生荧光的物质称为荧光素单参数荧光直方图双参数荧光散点图FlowCytometryPrinciples荧光素的激发和发射光谱激发光谱（Excitation，Ex）-是指能特异性地激发某种荧光素的一定波长范围内的光线，也称为吸收光谱。-我们一般标注的是吸收波峰，也就是最大吸收波长：Ex-Max发射光谱（Emission，Em）-是指荧光素发射的一定波长范围内的荧光。所有荧光都是宽谱发射。-一般标注的是发射波峰，即最大发射波长：Em-MaxFlowCytometryPrinciples了解目标抗原1）细胞表面抗原2

7、）细胞内或是核内抗原（固定、透膜步骤）3）以上两者兼备。先标记表面抗原，固定后，破膜标记胞内抗原。4）细胞内细胞因子的测定。使用细胞内蛋白分泌抑制剂，如monensin、BFA，使得细胞因子不能分泌到细胞外。（活化、固定、透膜）了解荧光染料及其工作原理，做出准确的选择。1）小分子化合物：FITC,PacificBlue2）大分子荧光蛋白：PerCP,PE,APC3）串联染料：PE-Cy5,PerCP-Cy5.5FlowCytometryPrinciples流式细胞术操作流程样本收集及处理制备单细胞悬液免疫荧光染色上