早期自然流产患者绒毛组织中核转录因子kappa b的表达

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1、早期自然流产患者绒毛组织中核转录因子kappaB的表达【关键词】早期自然流产核转录因子κB免疫组织化学激光扫描共聚焦显微镜滋养层　　ABSTRACT:ObjectiveToexaminethecellulardistributionandexpression,activationofnuclearfactorκB(NFκB)inthetissusesofchorionofearlyspontaneousabortion,andexploretherelationshipbetmunohistochemistry.ThenucleoplasmicratioofNFκBi

2、croscope.ResultsTheexpressionintensityofNFκBinthesyncytiotrophoblastsenalearlypregnancy(P<0.001).SignificantdifferenceexistedinthenucleoplasmicratioofNFκBexpressioninstromalcellsofchorionicvillibetalearlypregnancy(0.6977)(t=3.511,P<0.001).ConclusionLoalcellsofchorionicvilliandtheexc

3、essiveactivationofNFκBinvillusstromalcellsaresignificantlycorrelatedmunohistochemistry;laserscanningconfocalmicroscope;chorionicvilli　　自然流产的发病率约占妊娠总数的10%-15%，多数为早期自然流产，约40%原因不明。研究报道，自然流产患者的妊娠组织局部中前炎性因子，如干扰素γ(IFNγ)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)等较正常早孕组明显升高[13]。核转录因子κB(nuclearfactorκB,N

4、FκB)为多种重要前炎性因子的转录激活因子，具有多向性调节作用，与生殖关系密切[4－6]。在包括啮齿类动物及灵长类动物在内的多种动物子宫内膜、胚胎组织及蜕膜均有NFκB的表达，参与月经周期、着床、胚胎发育和分娩等过程[78]。本研究通过检测自然流产患者绒毛组织中NFκBp65的表达及核移位改变,探讨其在自然流产发病中的作用。　　1对象与方法　　1.1研究对象①流产组(简称SA组)：选择2004年11月至2005年8月间在西安交通大学医学院第一附属医院及西安市第四医院妇产科门诊就诊的孕7-10周妇女，出现阴道流血或(和)下腹部疼痛，通过详细的询问病史与系统检查，并经妇科

5、及B超检查确诊为宫内孕，排除其他原因所致阴道流血及腹痛，诊断为自然流产者31例，平均年龄29.3岁，平均孕期59.6d；②对照组：选择同期妊娠，无异常孕产史，孕7-10周并行人工流产术的健康妇女30例，本次妊娠经过无异常，并经B超提示胚胎发育正常，平均年龄27.7岁，平均孕期57.9d。两组年龄及孕周均无显著性差异(P>0.05)。　　1.2主要试剂兔抗人NFκBP65抗体购自SantaCruz公司；SP免疫组化染色试剂盒购自美国ZYMED公司；异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗兔抗体购自美国SouthernBiotech公司；碘化丙啶(PI)购自Sigma公司。　

6、　1.3方法　　1.3.1标本采集清宫或人工流产手术后取得绒毛和蜕膜组织立刻浸入生理盐水中，漂洗干净后滤纸沾干，置入40g/L多聚甲醛中固定2-6h后，将组织置250g/L蔗糖溶液中过夜，沉底后-70℃中冻存。将制备好的组织标本于恒冷箱冰冻切片机上进行切片，厚度为10μm2张(10μm是平均的细胞直径，共聚焦显微镜检测用)和5μm(免疫组化用)2张，吹干后置-20℃冰冻待用。　　1.3.2免疫组化染色采用免疫组化SP法对实验标本分批染色，操作按试剂盒说明书并略加改动。PBS缓冲液代替一抗为阴性对照。经DAB显色，苏木素复染后封片，于48h内光镜下阅片。每份标本随机选取5个视野

7、，每个视野高倍镜下计数1000个细胞。阳性细胞判断标准：细胞结构清楚，胞膜或胞浆内棕褐色颗粒清晰，阳性细胞与背景对比清晰；NFκB阳性着色为棕黄色。阳性分级参考Carcia的半定量分级方法确定细胞着色：淡黄色记数为1，棕黄色记数为2，深褐色记数为3；阳性着色细胞比例：小于20%记数为1，20%-50%记数为2，大于50%记数为3。以上两项相加：2-3为弱阳性(＋)，3-4为阳性()，≥4为强阳性()。细胞结构清晰，无棕褐色颗粒出现判断为阴性(-)。　　1.3.3共聚焦显微镜检测取切片厚度为10μm