膀胱出口梗阻后逼尿肌中转化生长因子β1的表达与膀胱重量改变的关系

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1、膀胱出口梗阻后逼尿肌中转化生长因子β1的表达与膀胱重量改变的关系：白志明，刘振湘，吕蔡，张冲，吴万文【摘要】目的：探讨膀胱出口梗阻(BOO)后逼尿肌中转化生长因子β1(TGF)β1的表达与膀胱重量改变的关系。方法：随机选择2003年6月至2005年6月入院患者21例，其中BOO患者16例(BOO组)，为住院诊断良性前列腺增生症(BPH)患者，行耻骨上经膀胱前列腺摘除术;对照组5例，为外伤等情况入院并排除有下尿路梗阻病史者，行开放手术治疗。两组术前均行B超检查测定膀胱重量，术中切取膀胱上壁组织，检测膀胱逼尿肌中

2、TGFβ1mRNA的表达，并比较其与膀胱重量的相关性。结果：BOO组与对照组膀胱重量分别为(92.15±34.89)、(56.08±20.35)g，BOO组明显高于对照组(P<0.05);与对照组[(0.18±0.13)×106]相比，BOO组TGFβ1mRNA表达量[(3.60±7.30)×106]显著增加(P<0.01);且BOO组中TGFβ1mRNA表达量与膀胱重量改变呈明显正相关(P<0.05)，而对照组无相关性。结论：BOO后膀胱逼尿肌中TGFβ1表达明显增加，其可能在膀胱逼尿肌

3、的功能改变中发挥作用。【关键词】海口市人民医院泌尿外科，海南海口570208)[ABSTRACT]Objective:Todeterminecorrelationbetassinpatientsy(groupA)andfivepatientsaunderlyfromJune2003toJune2005andstudied.Thebladdermssofpatientsinedbyultrasonographybeforeoperation,andasmallpatchofbladderRNA,andcorrelat

4、ionofbladdermassassofpatientsingroupAandBRNAinbladdersofpatientsingroupAandBassRNAinpatientsofgroupA(P<0.05),andthereassandexpressionofTGFβ1mRNAinpatientsofgroupB.Conclusion:ExpressionofbladderdetrusorTGFβ1mRNAincreasessubstantiallyinpatientsayplayanimpor

5、tantroleinthechangeofbladderdetrusorfunction.　　[KEYADZUUVmini1240)，PE9600PCR仪(美国PerkinElmer公司)，荧光定量仪PE7000全自动荧光定量PCR仪(美国PerkinElmer公司)。　　1.3组织RNA的提取及样品鉴定　　组织块(约100mg)置匀浆器，加TRIZol(100mg组织加TRIZol2mL)，冷冻匀浆，置Eppendorf管，15～30℃孵育5min，加入氯仿(0.2mL氯仿/1mLTRIZol)，盖紧盖子，用力摇

6、动15s，15～30℃孵育2～3min，4℃12000r/min离心15min，取上清液至新的Eppendorf管，加异丙醇(0.5mL异丙醇/mLTRIzol)，15～30℃孵育样品10min，4℃12000r/min离心10min，弃上清液，75%乙醇洗涤沉淀1次(至少1mL75%乙醇/1mLTRIzol)，4℃7500r/min离心5min，弃乙醇，空气或真空干燥5～10min(不要完全干燥)，加DEPC处理水溶解RNA，-80℃保存备用。若长期保存，加入2.5倍体积乙醇，置-80℃保存。　　浓度计算：每份样

7、品在紫外分光光度计上测定波长为260nm时的吸光度值。浓度计算公式：浓度(g/L)=OD260×稀释倍数×40/1000。　　1.4逆转录反应　　取5μLRNA模板做逆转录反应，仪器为PE9600PCR仪，反应体系如下：德国QIAGEN公司RTPCR试剂盒，5×逆转录buffer4μL;上游引物0.4μL;下游引物0.4μL;dNTPs(25mmol/L)0.2μL;MMLV(10U/μL)1μL;DEPC水9μL;RNA模板5μL;总体积：20μL;逆转录buffer成分：50mmol/LTrisHCl(pH

8、8.0),50mmol/LKCl,4mmol/LMgCl2,10mmol/LDTT;反应条件：37℃1h，然后95℃3min。　　1.5荧光定量PCR反应　　用荧光定量仪PE7000全自动荧光定量PCR仪检测肌球蛋白、肌动蛋白mRNA表达。肌球蛋白的上、下游引物分别为：5′TCGACGTCACGGGTTACATC3′，5′CGAATTGCCCGTGAT