银杏黄酮苷元对内皮细胞植物血凝素样低密度脂蛋白受体

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1、银杏黄酮苷元对内皮细胞植物血凝素样低密度脂蛋白受体：何艳，付永昕，吴立荣，方颖，李安敏，陈云【摘要】目的：探讨银杏黄酮苷元对氧化低密度脂蛋白(oxidizedlog/L银杏黄酮苷元与脐静脉内皮细胞株ECV304共同培养6～48h可显著抑制oxLDL诱导的内皮细胞LOX1mRNA和蛋白表达（P<0.05），具有浓度、时间效应关系(P<0.05)；LOX1拮抗剂聚肌苷酸可抑制oxLDL诱导的内皮细胞LOX1mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论：oxLDL可能通过LOX1导致内皮功能障碍，银杏黄酮苷元可显著抑制oxLDL诱导的内皮细胞

2、LOX1表达，这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。【关键词】受体，LDL；银杏；黄酮类；内皮，血管　　［Abstract］Objective:Toinvestigatetheregulatingeffectsofginkgetinaglycone(GA)onoxidizedloanumbilicalveinendothelialcellline304(ECV304).Methods:RTPCRandSPimmunohistochemistryassayRNAanditsproteing/LGAfor6～48hours（P<0.05）,andtosomeex

3、tend,theinhibitoryeffectappeareddependantonthedrugconcentrationandactiontime（P<0.05）.LOX1receptorinhibitor,polyinosinicacidshoRNAandproteininducedbyoxLDL(P<0.05).Conclusions:EndothelialdysfunctioncouldbecausedbyoxLDLthroughLOX1,andGAcaninhibitsignificantlytheexpressionofoxLD

4、LinducedLOX1,aybeoneofitsantiatherosclerosismechanisms.　　［Key,vascular　　氧化型低密度脂蛋白（oxidizedloa），新生小牛血清（杭州四季青生物工程材料研究所），总RNA提取Trizol试剂及逆转录聚合酶链反应（ReversetranscriptionpolymersechainreactionRTPCR）试剂盒（北京天根生化科技有限公司），LOX1兔抗人多克隆抗体（SataCruz）；染色体图像分析仪（Leica），梯度PCR仪（Eppendorf公司AG22331型），凝胶图像分

5、析系统（Eppendorf公司AG22331型）；上海捷瑞生物工程有限公司合成下列引物。LOX1mRNA（193bp）上游引物：TTACTCTCCATGGTGGTGCC，下游引物：AGCTTCTTCTGCTTGTTGCC；βactinmRNA(295bp)上游引物：5TCACCCACAATGTGCCCATCTACGA3，下游引物：5CAGCGGAACCGCTCATTGCCAATGG3。银杏黄酮苷元（GinkgetinAglycone，GA）由贵州省生化中心何照范教授惠赠（主要成分：槲皮素25.75%、山奈酚15.26%、异鼠李素1.77%、总黄酮苷元占总

6、成分含量42.79%），其它试剂均为分析纯。　　1.2人脐静脉内皮细胞株ECV304培养　　人脐静脉内皮细胞株ECV304用10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml硫酸链霉素的DMEM培养液培养，置于37℃、5%CO2培养箱中孵育，当细胞生长至80%融合以上时，用体积分数0.25%胰酶消化后，以1∶2或1∶3传代，传代后第2天换液1次，以后每2～3d换1次液，约3～4d可长成单层细胞。　　1.3实验分组　　取对数生长期细胞，随机分为对照组（培养基）、oxLDL组（培养基中加入终浓度为50mg/L的oxLDL后继续培养24h）、银杏黄酮苷元浓度效应组（

7、GA6.25mg/L、12.5mg/L、25mg/L、50mg/L预先培养48h，然后加入终浓度为50mg/L的oxLDL培养24h）、银杏黄酮苷元时间效应组（GA25mg/L预先分别作用6、12、24h后，加入终浓度为50mg/L的oxLDL培养24h）和LOX1拮抗剂组（PIA250mg/L预先作用2h后，加入终浓度为50mg/L的oxLDL培养24h）。　　1.4形态学观察　　相差显微镜观察各组内皮细胞形态变化。　　1.5LOX1mRNA测定　　样品总RNA提取采用Trizol试剂盒，操作按试剂盒说明进行。A260/A280测定RNA浓度和纯度。采